编审专家：
张镭 中日友好医院 药剂科 副主任药师
2020年3月6日，国务院联防联控机制召开新闻发布会。国家卫健委医药卫生科技发展研究中心主任郑忠伟在介绍疫苗研发工作时表示，目前正在沿着5条技术路线推进疫苗攻关工作，包括：灭活疫苗、基因工程*亚单位疫苗、腺病毒载体疫苗、减毒流感病毒载体疫苗和核酸疫苗。目前，5条技术路线都在稳步推进。估计在2020年4月份，根据国家有关法律法规的规定，可能有希望有部分疫苗能够进入临床或者应急使用。
那么，这5条技术路线的原理是什么？各有什么特点？是如何起作用的？我们将分别向您详细介绍这5条技术路线。今天，我们先来了解一下第一种——灭活疫苗。
什么是灭活疫苗？
根据《中华人民共和国药典》（2015版）三部的定义，灭活疫苗是指病原微生物经培养、增殖，用理化方法灭活后制成的疫苗。灭活疫苗是一种经典的疫苗形式，也是一种易于快速研究和制备的有效疫苗。过去的经验表明，基于人类已经非常娴熟地掌握了病毒类灭活疫苗制备技术，一旦有病毒性传染病发生时，人们在考虑研究开发针对该病毒的疫苗时，优先选择的就是灭活疫苗。
哪些病毒疫苗不适合使用灭活疫苗形式？
虽然灭活疫苗是经典的疫苗形式，并不是所有的病毒都适合于灭活疫苗的形式。其不适合的原因有如下几种：
免疫效果不佳，如灭活的流行性腮腺炎病毒、麻疹病毒、获得性免疫缺陷病毒（HIV）等。
可引发免疫病理反应，如灭活的麻疹病毒、登革热病毒等。
有些疫苗则因为安全性问题而被停止使用，如猴肾细胞培养的灭活腺病毒疫苗，于1956年开始临床试验，但是因为有猴病毒SV40（Simian Virus 40）污染且批间差异明显，再则，第3、7血清型有可能具有致肿瘤性（oncogenicity），故于1963年停止使用。
灭活疫苗与其他种类疫苗相比有哪些优缺点？
与减毒活疫苗相比，灭活疫苗的优点是消除了病毒的感染复制能力。与亚单位疫苗相比，因为它们具有较完整分子空间结构，抗原成分的空间构象比较接近原始状态，而且在一般情况下，完整病毒的免疫刺激能力比蛋白分子强，因此，灭活的完整病毒免疫原性相对较好。缺点是，与亚单位疫苗相比人体免疫接种后的副作用较大；加之在技术上存在某些难题，例如有些病毒难以适应细胞培养，或者是病毒适应某些特定细胞培养的过程长，由于病毒培养及灭活等条件不易控制一致，故会出现批间差异的问题。
作为灭活病毒性疫苗的基本条件之一就是利用动物或细胞能够成功地分离和培养特定的病毒，而且能够成规模地大量培养或制备病毒。
灭活疫苗是如何生产出来的？
制备灭活疫苗的工艺流程是比较复杂的，下图概括性地描述了它的制作流程。
接种病毒（1）→病毒培养（2）→收获病毒原液体（3）→过滤去除组织成细胞碎片（4）→浓缩病毒（5）→灭活病毒（6）→提取或纯化病毒（7）→特殊制备（裂解等）（7）→再浓缩病毒（8）→特殊制备（稀释、调pH等）（9）→加入佐剂、赋形剂等（10）→半成品（11）→分装（冻干）（12）→质量检定（13）→外包装（14）
由于疫苗制作过程比较复杂，限于篇幅，这里仅就这些关键环节加以简介。
病毒培养：常用病毒培养方式有三种。动物器官培养，如利用小鼠脑组织制备乙脑疫苗；禽胚培养（鸡胚），如流感疫苗；细胞培养，分为原代细胞和传代细胞，一些狂犬疫苗、甲型肝炎疫苗都是使用细胞培养方式。
灭活病毒：病毒的灭活是指经过一定的物理化学条件处理病毒，致使病毒失去复制能力和致病力（毒力）。物理方法包括：热力、紫外线、电离辐射等。化学灭活剂包括：甲醛、β-丙内酯、三磷酸正丁酯等。选择灭活剂首先考虑在体内少量使用是否安全，或者能否从疫苗产品中祛除；其次，是否能够有效灭活病毒，同时又不会严重地破坏病毒的抗原性；其三，是否容易得到和化学纯度等。因此，我们可以理解灭活是指破坏病原体的致病生物学特性，但尽可能避免影响其免疫原性或避免破坏抗原活性的物理化学条件过程。
纯化病毒：病毒培养物的纯化精制是灭活疫苗的常用加工工艺技术之一。经过纯化精制，从而获得高纯度的目标病毒。目前，大多数疫苗纯化加工工艺都采用超速离心技术和液相层析技术进行全病毒的精制。
加入佐剂：在疫苗抗原中加入佐剂是为了提高疫苗抗原对人体的免疫刺激作用，从而提高疫苗的免疫效果。例如，氢氧化铝是一种常用的疫苗佐剂，它可以刺激注射部位的局部炎症反应，有利于机体的免疫细胞的趋化聚集和抗原提呈。
我们生活中常见的灭活疫苗有哪些？
病毒灭活疫苗是非常重要的一类疫苗，我们平时常见的灭活疫苗有：狂犬病疫苗、灭活脊髓灰质炎疫苗（小儿麻痹症）、甲型肝炎疫苗、乙型流行性脑炎疫苗、流感疫苗、流行性出血热疫苗、森林脑炎疫苗等。
参考文献
1.国家药典委员会.中华人民共和国药典：三部.2015年版.北京：中国医药科技出版社，2017.
2.刁连东，翟如芳等.疫苗应用与安全问答.北京：中国医药科技出版社，2017.
3.赵铠.疫苗研究与应用.北京：中国医药科技出版社，2018.
4.https://kuaibao.qq.com/s/20200306AZP5A200?refer=kb_news&coral_uin=ecbcd87391b81ede9bbf60dc76edba771258139f08b8f84d3cb75e3e25decf62d7&omgid=78ae4bd89be73ef689c17e78423cb0e3&chlid=&atype=6
