9.沉淀剂乙醇用量的筛选试验
沉淀剂乙醇用量对螯合反应的影响很大，随着乙醇用量的增加，螯合物的螯合率及得率随之增加，在乙醇用量为反应液体积的4，5，6倍时，螯合率分别为79.45%，88.25%，87.43%，得率分别为56.08%，57.88%，58.04%。因此选择乙醇用量为反应液体积的4，5，6倍作为响应面实验条件。
傅里叶变换红外光谱（FTIR）分析大鲵肽和大鲵肽-锌螯合物的傅里叶光谱所示，灰色显示的是大鲵肽的红外光谱图，黑色点状线条显示的是大鲵肽-锌螯合物的红外光谱图。大鲵肽与有机配体锌离子的相互作用表现为肽链中羧基和酰胺基吸收带的改变，大鲵肽的—NH2的吸收峰为3269cm-1，酰胺Ⅰ带和酰胺Ⅱ带的Ｃ=Ｏ的特征峰为1627cm-1和1513cm-1，—COO-的吸收峰为1387cm-1，与硫酸锌反应后—NH2的吸收峰为3357cm-1，酰胺Ⅰ带和Ⅱ带Ｃ=Ｏ的特征峰为1611cm-1和1493cm-1，—COO-的吸收峰为1351cm-1。
与大鲵肽的红外光谱图相比，当大鲵肽和有机锌离子螯合后，整个谱图的波形发生了改变，在617cm-1处和519cm-1处的两个吸收峰合并成为一个波数在595cm-1的吸收峰，可能是因为C—H面外弯曲振动引起的。其特征吸收峰的显著位移表明大鲵肽与锌离子反应所形成的螯合物，是一种不同于母体分子的新化合物，肽键上的氨基、羧基、羰基都参与了螯合反应，与锌离子发生结合后生成了新的物质。
紫外扫描分析
大鲵肽和大鲵肽-锌螯合物的紫外吸收光谱有显著的差异。大鲵肽的强吸收峰在200nm左右，280nm左右无特征吸收峰，这与肽键的光谱特征和肽中不含色氨酸有关。加入锌离子后大鲵肽的最大吸收光从200nm偏移到210nm附近，大鲵肽-锌螯合物的吸光值明显低于大鲵肽的吸光值，随着锌离子的加入，大鲵肽的特征峰发生了蓝移和下降，这是由于锌离子与多肽羰基上的氧原子和氨基键上的氮原子结合所致。吸收峰的偏移和峰强度的变化表明了大鲵肽与锌离子发生了螯合生成了一种新的物质大鲵肽-锌螯合物。
扫描电镜分析
利用扫描电镜对大鲵肽粉末和大鲵肽-锌螯合物粉末的微观表面结构进行观察，大鲵肽和大鲵肽-锌螯合物的扫描电镜。大鲵肽与大鲵肽-锌螯合物表面结构有明显的差异。大鲵肽呈现出光滑的规则球体颗粒形状和片状；大鲵肽与锌螯合后则呈现出不规则形状且多为聚合状态，具有点状和褶皱形态，具有更大的比表面积和孔隙率。
Xiao等人研究表明锌结合后增加了肽的粗糙度，这是由于锌离子与肽的氨基酸残基在脱水过程中相互作用加速了肽的二聚，并产生了二聚体。由于分子间作用、表面张力等作用，肽变成颗粒聚集形成了更大的吸收蔟，此外，水溶液中分子间的氢键也导致肽中的羰基、羧基和氨基的折叠和聚集。
- 本文通过对大鲵肽-锌螯合物的制备工艺进行了单因素和响应面试验确定了最佳螯合工艺：大鲵肽与硫酸锌质量比为25：1、螯合pH为5.18、醇沉倍数5、肽浓度0.04g/mL、螯合温度60℃、螯合时间60min。大鲵肽-锌螯合物的螯合率与螯合得率分别为88.57%、57.25%。（2）通过对傅里叶红外光谱图分析可知大鲵肽与锌离子反应后形成了一种不同于母体分子的新化合物，肽键上的氨基、羧基、羰基都参与了螯合反应，与锌离子发生结合后生成了新的物质。
