-＜瞬态转化＞-
我们首先研究了用于烟草品种的注射器注射技术是否适用于杂交白杨叶片。
用钝头塑料注射器将浸润介质和5 mM MEsKOH 注入在土壤中生长1个月的全张杨树叶片的背面表皮。培养基在注射器接触区域周围渗透，但由于叶脉网络的限制，其渗透范围更广。
接下来，我们研究了农杆菌介导的真空渗透是否增加了杂交杨树叶片渗透介质的渗透率。
简单地说，在无菌琼脂培养基中生长的杂交杨树插枝被淹没在有或没有农杆菌的溶液中0.003% Silwet L-77，然后真空浸润。
在低压真空和洗涤剂的帮助下，渗透溶液渗透到整个白杨叶子中。因此，我们可以开发一种真空介导的农杆菌渗透技术。
利用二元表达载体pPZP221CaMV35S::EmGFP在A. tummefaciens菌株GV3101 中的瞬时转化监测。农杆菌细胞生长至固定期后再悬浮于浸润培养基中。
真空浸润使用三到四周树龄的白杨插枝，不去除任何组织。当使用与根组织分离的芽时，渗透培养基不能从叶片的细胞间隙中蒸发出来，很少有细胞成功转化。
转化3天后，GFP信号主要在幼叶中观察到，分散在单个细胞中。大部分转化细胞集中在叶片的中部到顶端。
尽管将完整的植物浸泡在细菌溶液中并真空浸润，但叶柄、托叶、茎和根中很少有细胞具有GFP信号。
在叶组织的表皮细胞、保护细胞、叶肉细胞等多种细胞类型中均检测到GFP荧光。该结果表明，农杆菌介导的真空浸润技术可用于分析嫩叶细胞。
在拟南芥农杆菌介导的浸润试验中也描述了组织依赖性转化的有效性，其中幼子叶比叶柄和根的转化程度更高。在接下来的研究中，我们主要使用嫩叶来监测转化细胞。
-＜条件＞-
对浸润介质、Silwet L-77浓度、细菌生长阶段、细菌密度等转化条件进行优化。利用其他植物物种进行的研究报告称，这些条件会影响农杆菌渗透技术的瞬时转化效率。
我们首先估算了渗透介质对转化效率的影响，试验了两种培养基：
（1）在农杆菌介导的拟南芥真空浸润中建立的10 mM MgCl2和5 mM MES-KOH；（2）在杂交白杨培养基上建立的0.5 × MS培养基和5 mM MES-l KОH。
将饱和的农杆菌过夜培养物重新悬浮在含有200 μM乙酰丁香的培养基中，然后稀释至最终od600 = 0.5。
