琼脂糖凝胶电泳操作步骤,琼脂糖凝胶电泳配方与步骤文库

首页 > 科技 > 作者:YD1662024-04-28 06:56:27

琼脂糖凝胶电泳(Agarose Gel Electrophoresis)用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳,用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。琼脂糖凝胶电泳的分析原理与其他支持物电泳最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。

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图1 琼脂糖凝胶电泳示意图

琼脂糖凝胶电泳原理

琼脂糖凝胶电泳,是以琼脂糖为介质,对不同大小的 DNA 或 RNA 实现分离的一种电泳方法。琼脂糖是一种多糖,具有亲水性,但是不带电荷。使得 DNA 在碱性条件下使其带负电荷(pH8.0 的缓冲液),在电流作用下,以琼脂糖凝胶为介质,由负极向正极移动,根据不同的 DNA 分子片段的大小和形状不同,在电场中泳动的速率也不相同,同时在样品中加入染料(如 EB 或花青素类染料)能够和 DNA 分子间形成络合物,经过紫外照射,可以看到 DNA 的位置(比对 marker 可知分子量大小),从而达到分离、鉴定的目的。

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图 2 琼脂糖凝胶电泳原理

琼脂糖凝胶电泳步骤

琼脂糖凝胶电泳的实验步骤,包括样品准备、凝胶制备、电泳运行、染色观察等关键过程,通过这一方法,研究人员能够迅速获得关于核酸片段大小、纯度以及特定序列存在与否的信息。

电泳装置 电泳装置主要包括两个部分:电源和水平电泳槽。电源提供直流电,在电泳槽中产生电场,驱动带电分子的迁移。

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图3 电泳装置

琼脂糖凝胶电泳浓度

琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围:

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