图1 无定形尿酸结晶对镜检的干扰
A:400倍镜下的无定形尿酸结晶;C:当无定形结晶、真菌、细菌同时存在时,对结果统计干扰极大。
尽管随着临床检验自动化水平的提高,国内很多医疗卫生机构都已经普及了尿有形成分的自动化分析,但自动化分析实际上只是通过算法识别图像代替了人眼镜检,原理上同样会受到无定形结晶的干扰。
此外,从宏观上看,这些不定形结晶的存在也会使尿液的混浊度增加(图2)。
图2 不定形结晶的存在使尿液样本更加混浊
目前已有研究表明,无定形磷酸盐可以用 2%的乙酸快速溶解,而对无定形尿酸盐则缺乏相应的研究。因此,找到一种安全、快速溶解尿沉渣中的无定形尿酸结晶的方案就显得较为迫切。
也正是出于这一目的,本研究的研究者们尝试总结出了一种处理方法来解决无定形结晶的干扰,并将其总结成了操作规程(Protocols),我们为各位读者编译整理如下:
操作规程
鉴别标准
当混浊的尿液呈微粉红色(由于尿中的尿红素附着)、高比重和酸性 pH 值时,应当怀疑存在无定形尿酸盐晶体。
操作步骤
1. 预热样品:
将 10-12 mL 混合均匀的样品转移到尿液分析试管中并盖上盖子;
将试管置于 60°C 的水浴中 90 秒;
将试管倒置并冷却到室温。
注意事项:必须在离心前进行预热,否则离心形成的沉淀由于密度过大,无法被很好地溶解。
2. 消除或验证沉渣中的无定形尿酸盐:
转移 10μL 悬浮良好的尿沉渣到显微镜载玻片上;
加入 10μL 50mmol/L NaOH,并用移液器吸头轻轻搅拌;
盖上盖玻片并在显微镜下/自动化分析仪中进行检查。
注意事项:如果晶体不能完全溶解,可将样本和NaOH的比例调整为 5 μL 尿沉渣和 15 μL NaOH 半定量细菌和酵母菌时要考虑稀释系数。使用此方法时不能对管型、RBC 或 WBC进行定量分析。
安全提示
50 mmol/L NaOH 溶液(0.2%) 是弱碱,它的 NFPA(美国消防协会) 健康等级为 1,被认为具有低伤害风险。可以直接购买此浓度的试剂,也可以选择从 10% NaOH 储备试剂溶液进行制备。NaOH是一种强碱,可能导致严重烧伤和眼部损伤。使用时应采取眼部和面部保护措施,储存和制备试剂时,请务必阅读安全操作规范。
处理后的效果如何?
在选取了207份成年人的尿液样本,并选取了其中56份存在无定形结晶的样本进行重复试验后,研究者认为这一处理方法能够去除尿液样本中绝大多数的无定形尿酸结晶,效果良好。(图3)
图3 经过处理后的样本编号为12的尿液样本400倍镜下视野对比
A. 未经处理的12号尿液样本;B. 用 50mmol/L NaOH 处理后的12号尿液样本,提示细菌存在;C. 含有无定形晶体、酵母和细菌的尿沉渣;D. 用50mmol/L NaOH 处理后,很容易看到细菌和酵母。
不过,研究者也特别指出,由于这一浓度下的NaOH会对细胞形态造成影响,因此红细胞、白细胞、管型等有形成分不应该使用这种处理方法来进行检查。
参考文献
Behan K J, Johnston M A. Protocols to Dissolve Amorphous Urate Crystals in Urine[J]. Laboratory Medicine, 2022, 53(3): e63-e68.
编辑作者
作者:Kristina J. Behan | Michael A. Johnston
编辑:薄奕
封面图及文中图片来源:视觉中国、参考文献
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