PCR实验包括三大主要的热循环步骤 整个过程包括:变性、退火、延伸。在这个过程中需要多种必要的反应成分 ,通过对PCR的设置做相应的调整,便可以获得一些特殊的实验结果,如产率提高,特异性增强或反应时间缩短等
热启动PCR:常用于增强PCR扩增的特异性。通过借助一酶的修饰物来抑制某一种基本成分延迟DNA合成,直到PCR仪达到变性温度。这种修饰可避免产生非特异性扩增。由于DNA聚合酶在室温下的活性被抑制,热启动技术为在室温下配制多个PCR反应体系提供了极大的便利,且无需牺牲PCR反应的特异性。
降落PCR:另一种提升PCR反应特异性的方法是调整PCR循环的参数。在降落PCR中,前几个循环的退火温度设定为比引物的最高退火温度(Tm)再高几度,较高的温度有助于避免产生引物二聚体及非特异性引物-模板复合物的形成,因此可减少不希望出现的非目的扩增。在PCR起始阶段用较高的退火温度可减少非特异性PCR产物,促进特异性的扩增。
巢式PCR:巢式PCR是标准PCR的一种演变,其增强了反应特异性和目标扩增子的产量。在此方法中,需要设计两对PCR引物,一对外引物,一对巢式引物。需进行进行2轮PCR扩增,第一轮PCR的产物作为第二轮PCR的模板。
快速PCR:通过缩减PCR反应步骤所需的时间来完成更快的扩增,此条件特别适用于有高扩增能力的DNA聚合酶,这类聚合酶在每个结合中可引入更多的核苷酸。
Taq DNA聚合酶系列产品经过多步纯化精制而得。使用本产品扩增得到的PCR产物3′端带A碱基,可克隆至T载体。操作简单,扩增效果稳定,可实现1kb/30s延伸速度。