动物细胞细胞核移植流程图,动物细胞培养和核移植过程

首页 > 经验 > 作者:YD1662024-03-09 22:13:27

1.动物细胞工程常用的技术包括动物细胞培养,动物细胞融合和动物细胞细胞核移植等。其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础。

2.动物细胞培养所需要的营养条件包括糖类,氨基酸,无机盐和维生素等,其他条件如无菌无毒的环境,适宜的温度,PH和渗透压,适宜的气体条件等。

3.将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配置而成的培养基称为合成培养基。对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚,因此在使用合成培养基时需要加入血清等一些天然成分。培养动物细胞一般用液体培养基也称为培养液。

4.由于在体外培养细胞时,必须保证无菌无毒,既需要对培养液和所有培养用具进行灭菌处理,以及在无菌环境下操作培养液,还需要定期更换,以便清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。

5.哺乳动物细胞培养的温度多以36.5加减0.5度为宜,多数动物细胞生存的PH适宜为7.2到7.4。

6.动物细胞培养所需气体主要有氧气和二氧化碳,二氧化碳的主要作用是维持培养液的PH。在进行细胞培养时,通常采用培养皿或松盖培养瓶,并将它们置于含有95%空气和5%的二氧化碳的混合气体的二氧化碳培养箱中进行培养。

7.在进行细胞培养时,首先对动物组织用机械的方法或胰蛋白酶,胶原蛋白酶处理一段时间,将组织分散成单个细胞,然后用培养液将细胞制成细胞悬液,再将细胞悬液放入培养皿或培养瓶类,置于适宜环境中培养。

8.体外培养的动物细胞可以分为两大类,一类细胞能够悬浮于培养液中生长增殖,另一类需要贴附于某些基质表面才能生长增殖,大多数细胞属于这种类型,这种类型细胞往往贴附在培养瓶的甁壁上,这种现象称为细胞贴壁。

9.贴地生长的细胞在生长增殖时会发生接触抑制现象,即当贴壁细胞分裂生长到表面,相互接触时,细胞通常会停止分裂增殖,这时需要对细胞进行分瓶培养,让细胞继续增殖。

10.人们通常将分屏之前的细胞培养及动物组织经处理后的初次培养称为原代培养,将分瓶后的细胞培养称为传代培养。

11.在进行传代培养时,悬浮培养的细胞直接用离心法收集。贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶处理,使之分散为单个细胞,然后再用离心法收集。

12.动物细胞培养和植物细胞培养的相同之处与不同点。培养基不同:植物细胞(固体培养基),动物细胞(液体培养基)。培养基的成分不同:动物细胞培养必须利用动物血清,植物组织培养则不需要,而需要加入植物生长激素。  产物不同:植物组织培养最后一般得到新的植物个体,而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能性,因此得到的是只含同一种的细胞的一个细胞系(或者叫细胞群)。   原理不同:植物组织培养的原理为植物细胞的全能性,动物细胞培养的原理为细胞的增殖。过程不同:植物组织培养的过程为脱分化和再分化,动物细胞培养的过程为原代培养和传代培养。培养目的不同:植物组织培养是为了快速繁殖和获得无病毒植株,动物细胞培养是获得生物制品。

13.干细胞存在于早期胚胎骨髓和脐带血等多种组织和器官中,包括胚胎干细胞和成体干细胞。

14.胚胎干细胞简称ES细胞存在于早期胚胎中,具有分化成成年动物体内的任何一种类型的细胞,并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能。

15.诱导多能干细胞简称IPS细胞IPS细胞治疗了小鼠的镰状细胞贫血,还可以治疗阿尔茨海默症,心血管疾病等。

16.动物细胞融合技术就是使两个或多个细胞结合,形成一个细胞的技术融合后形成的杂交细胞,具有原来两个或多个细胞的遗传信息。

17.动物细胞融合与植物细胞原生质体融合的基本原理相同,诱导动物细胞融合的常用的方法是PEG融合法,电容合法和灭活病毒诱导法等。

18. 灭活是指用物理或化学手段,使病毒或细菌失去感染能力,但并不破坏他们的抗原结构。

19.早期为了获得抗体,就像动物体内反复注射某种抗原,使动物产生抗体,然后从动物血清中分离抗体,这种方法制备抗体,不仅产量低,纯度低,而且特异性差。

20.单克隆抗体的制备过程,让注射过特定抗原得到一种B淋巴细胞在体外与大量增殖的骨髓瘤细胞融合产生多种杂交瘤细胞。

21.用特定选择培养基进行筛选,只有融合的杂交瘤细胞才能生长。对经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选就可以得到足够数量的能分泌所需抗体的细胞,再将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养或者注射到小鼠腹腔内增殖,就可以获得大量的单克隆抗体。

22.抗体—药物偶联物ADC通过将细胞毒素与能特异性识别,肿瘤抗原的单克隆抗体结合,实现了对肿瘤细胞的选择性*伤,ADC通城有抗体接头和药物三部分组成。

23.细胞核移植技术是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中,使这个重新组合的细胞发育成新胚胎,既而发育成动物个体的技术。

24.哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。

25.减数分裂第二次的中期卵母细胞中的核其实是纺锤体染色体复合物,去核是除去该复合物。

26.体细胞核移植流程:取动物卵巢,并将其在体外培养到减数第二次分裂中期,通过显微操作去核,将高产供体细胞注入到去核的卵细胞。通过电容方法使两细胞融合,供体核进入卵母细胞,形成重构胚。用物理或化学方法,激活重构胚,使其完成细胞分裂和发育进程,再将胚胎移入受体母牛体内。

27.重构胚是指人工重新构建的胚胎具有发育成完整个体的能力。

28.目前,动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作法。也有人采用梯度离心,紫外线短时间照射和化学物质处理等,这些方没有穿透卵细胞透明带的情况下去核迫使其中的DNA变性。

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