近年来,动物疫病的防控与净化作为养殖业的重要议题被广泛讨论。不管是让人担忧的非瘟病毒,还是持续存在的蓝耳病毒,以及其他病原微生物,都不断威胁着养殖场的稳健生产。随着动物疫病检测技术的成熟,越来越多的养殖公司重视实验室的检测。通过实验室的检测,来协助生产,规避、预防、发现病原,从而达到阻断病原感染猪只的目的。
实验室检测并不是一套简单的操作流程。人、机、料、法、环中的任一环节出现漏洞都会影响到最终检测结果的准确性。
很多养殖企业实验室的自检实验室条件相对简陋,配备的简易离心机,转速达不到12000转(r/min),最高只有5000转(r/min),这对核酸提取的效率是否有影响?是否会影响最终的扩增检测结果?
针对这一问题,我们在某养殖企业自检实验室设计了一个简单的实验进行验证。
实验材料
冠牧精准诊断DNA/RNA核酸提取试剂盒(离心柱法)、冠牧精准诊断荧光PCR试剂、高速离心机(12000r/min)、掌上离心机(5000r/min)、上海宏石荧光定量PCR仪。两款离心机转子大小相当,仅离心转速有差异。
实验方法
- 取已知阳性的脾脏组织和粪便做为样本;
- 设置2组实验,第一组离心机转速5000r/min,第二组离心机转速12000r/min,每组实验做四个重复;
- 使用冠牧精准诊断柱式核酸提取试剂盒提取核酸产物50μL;
- 使用冠牧精准诊断荧光PCR试剂在上海宏石荧光定量PCR仪上进行检测。
实验结果
表 1 不同转速对核酸提取效率的影响
结果分析:
2种样本类型,8个测试,使用相同的柱提取试剂盒、反应试剂盒和荧光PCR仪,12000r/min离心提取比5000r/min离心提取的荧光PCR检测结果均有更低的Ct值,平均提前约0.87个Ct。
这个实验表明转速过低会影响核酸提取的效率,12000r/min比5000r/min的核酸提取效率更高。
冠牧观点
- 以上检测结果表明,转速能够影响柱提取的核酸提取效率,从而影响PCR扩增结果。
- 提取过程中使用低转速的离心机无法完全发挥提取试剂盒的性能,影响检测结果,导致可疑或者假阴性等异常结果的出现。
- 正确选择设备和试剂才能获得精准的检测结果,有效防控疫病。
冠牧精准诊断(湖南冠牧生物科技有限公司)聚焦于动物体外诊断试剂和设备领域,提供精准的动物疫病诊断试剂和设备,公司开发了猪病、禽病、反刍动物、水生动物荧光PCR试剂和抗体检测试剂,搭配配套的荧光定量PCR仪、核酸自动提取仪、酶标仪等设备,能够精准的诊断动物传染病,指导疫病防控。