分离纯化是有机化合物分析必不可少的过程。有机化合物的样品分析，首先要进行分离纯化步骤，才能达到分析结果准确的目的。不同的有机化合物样品有不同的纯化方法，要根据样品性质与杂质性质的差别来选择分离纯化的方法。
01
固体有机物的纯化方法
固体有机化合物一般用重结晶法提纯。
1.重结晶原理：在某一种溶剂中，固体有机化合物的溶解度随温度变化有较大的变化。在较高温度时的饱和溶液趁热过滤除不溶性杂质。母液放冷，在较低温度时有机化合物以晶体析出，过滤，可溶性杂质留在母液中而除去。可反复重结晶直到提纯有机化合物熔点不变为止。
2.一般操作步骤：
（1） 制成饱和热溶液（接近溶剂的沸点）
（2）热过滤（除不溶杂质）
（3） 自然冷却结晶
（4） 过滤晶体与洗涤
（5）干燥（减压或常压）
（6）标准品多次重结晶，直到m.p不变为止
02
液体有机物分离提纯方法
液体有机化合物一般用蒸馏法分离提纯
1.蒸馏法原理：依液体混合物中各组分沸点不同而分离。
2.关键：控制温度缓慢上升，收集不同温度范围的馏份。
3.蒸馏方法分类：
（1）常压蒸馏适用于b.p较低，在b.p时不分解的物质。
（2）减压蒸馏适用于b.p较高，或在b.p发生分解的物质。
（3）水蒸气蒸馏适用于不与水反应，b.p较高的物质。
（4）旋转浓缩蒸馏法一般用于提取液浓缩。
03
柱层析分离（固／液）有机物
1.原理： 混合物被束缚在色谱柱的固定相上，流动相自上而下流经固定相，带动被分离组分向下移动。与固定相作用力大的组分在流动过程中留在了 后面，与固定相作用力小的组分在流动过程中跑在了 前面。
2.柱层析分类：
（1）吸附色谱柱：吸附剂固体表面吸附各成分。
（2）分配色谱柱：惰性载体表面涂高沸点液体，被分离物在淋洗剂与高沸点液体之间溶解分配。
（3）凝胶色谱柱：多凝胶填粒、淋洗，凝胶网眼大小筛分不同尺寸的分子
04
薄层色谱分离提纯有机物
薄层色谱分离提纯简单快速。但分离容量不及柱色谱大， 效果也不及柱色谱好。
1.薄层分类：
（1）吸附色谱
（2）分配色谱：分配色谱又分正相色谱与反相色谱。
a.正相：含水吸附剂（固定相），弱极性流动相，极性小的移动快。
b.反相：钝化吸附剂（固定相），强极性流动相， 极性强的移动快。
2.一般操作步骤：点样—展开—显色—计算Rf 值。
05
低温冷冻分离法
1.常用于食品中有机化合物的分析：有机化合物与大量的脂肪、蜡质混合在一起，给分离造成困难。
2.分离原理：由于动植物组织中的脂肪、蜡质可以在低温下于丙酮溶液中生成沉淀，将样品用丙酮反复萃取，萃取液经过冷冻，过滤而分离掉脂肪、蜡质沉淀，而有机化合物留在丙酮中。
3.冷冻温度一般在-70℃。
06
液相萃取法
1.萃取原理：一组互不相溶的溶剂中溶有某一成分溶质。这种溶质以一定比例（浓度比）在两相中分配。两相中分配比称分配系数。利用同组溶剂中各物质分配系数不同或同种物质在不同溶剂组中分配系数不同而分开。（选择合适溶剂，反复分配）
2.分类
（1）等容一次分配：一组等容互不相溶的溶剂中加入某一溶质，平衡后弱极性溶剂中有机化合物比值是P；强极性溶剂中比值是Q；显然P Q=1，两相浓度比为P/Q。
（2）等容多次分配：取几份等体积强极性溶剂在1份弱极性溶剂中萃取几次后，弱极性溶剂中溶质含量是P的n次方,强极性溶剂中溶剂含量是1- P的n次方 。
（3）不等容一次分配：设弱极性溶剂体积是强极性体积的α倍。依定义，一次分配后弱极性溶剂中含量是αP，强极性溶剂中含量为Q；弱极性溶剂中所含有机化合物占有机化合物总量比例为：αP/（Q αP）。
07
化学提纯法
化学提纯法是使杂质与某种试剂发生化学反应除掉或者消除干扰。有机化合物提取液干扰分析成分很大程度是脂肪与色素。最常用的化学净化法是用酸处理对酸稳定的有机化合物或用碱处理对碱稳定的有机化合物来除杂。
08
固相萃取技术
1.原理：根据样品在两相的差异， 即在固相和液相分配系数不同，实现有机物的分离纯化。保留或洗脱的机制取决于被分析物与固相表面活性基团，以及被分析物与液相之间分子作用力。
2.两种洗脱模式：
（1）被分析物与固相之间的亲和力比其与所存在的生物介质的亲和力更强则被保留。用一种亲和力更强的洗脱液洗脱。
（2）存在的生物介质与固相亲和力更强，则用溶剂直接洗脱。
