调节性T细胞(Regulatory cells,简称Tregs )是一类控制体内自身免疫反应性的T细胞亚群，早期亦称做suppressor T cells。
分类：调节性T细胞可分为诱导产生的适应性调节性T细胞(a T-regs或i T-regs) 和天然产生的自然调节性T细胞（n T-regs）。其中，适应性调节性T细胞（aTreg或iTreg）：它是在小剂量抗原或免疫抑制性细胞因子诱导下由外周幼稚T细胞发育而成，包括Tr1，Th3等细胞，主要分泌IL-10和TGF-β发挥免疫负调控作用。自然调节性T细胞（n T-regs）：主要为CD4 CD25 Treg，这个细胞群可以抑制这些自身免疫疾病的发生，具备免疫调节能力。CD4 CD25 Treg除表达CD4分子和CD25分子外，其特征标志为其高表达转录因子Foxp3。CD127也可作为该群细胞的一个特异性标志，Foxp3高表达和CD127低表达之间有很好的相关性，即Foxp3的细胞群为CD4 CD25 CD127 -Treg分泌TGF-β和IL-10，这两种细胞因子与其免疫调节功能的发挥相关。
Tregs细胞检测意义：
调节性T细胞与自身免疫性疾病（如I型糖尿病、系统性红斑狼疮、再生障碍性贫血、多发性硬化、炎症性肠病、重症肌无力）有关联，类风湿性关节炎、自身免疫性甲状腺炎，自身免疫性肝病、多种肾脏疾病等很多自身免疫性疾病的发病也有关。调节性T细胞对于自身免疫性疾病的发生和发展都具有重要意义，对其进行深入研究将有助于了解自身免疫性疾病的发病机制，对疾病预后判断、进一步的治疗有着深远的意义。
下面我们来讲一下人外周血自然调节性T细胞（Treg细胞）流式检测实例
Human (Blood): Treg cells
1.标志物：CD4 CD25 Foxp3 cells；
2.流式细胞仪：：Beckman Coulter，CytoFLEX；
3.Panel设置如下
示例图
特别说明：由于CD25属于连续性表达的抗体，尽量在允许的条件下设置FMO对照，FoxP3我们强烈建议使用FMO对照，因为表达量不高，如果不设置FMO，可能会设门不正确的情况。
4.流式抗体及用量：FITC anti-humanCD4(5μL/test)， APC anti-human CD25 (5μL/test)， PE anti-human Foxp3(5μL/test)；
5.淋巴细胞分离：采用人淋巴细胞分离液分离人外周血淋巴细胞。首先取3-5ml淋巴细胞分离液，平衡到室温，然后把用3ml PBS稀释3ml外周血后加到淋巴细胞分离液上层（注意小心操作，切勿把血液加到淋巴细胞分离液下层），500g离心30min取白膜层细胞，2ml PBS洗涤2~3后，细胞计数，调整细胞浓度至1×107个/ml。后续实验全部采用100μL /tests/106cells。
6.染色条件：首先Human TruStain FcX™(5μL/test)，4℃，15 min； 接着CD4和CD25表面染色，4℃， 30 min；然后破膜固定（True-Nuclear™ Transcription Factor Buffer Set；一般情况下采用True-Nuclear™ Fix Diluent稀释True-Nuclear™ 4× Fix Concentrate为1×Fix solution)，室温避光，60 min后采用ddH2O稀释10× PermBuffer成1×Perm Buffer进行破膜，重复2~3次；
最后采用100μL1×Perm Buffer重悬细胞，Foxp3核内染色，4℃，30 min。
7.分析软件：Flowjo (10.0.7)
8.圈门策略及染色: (见下图)
在CD4＋细胞群选择之后，分析CD25＋Foxp3＋的Treg，这是很经典的设门。
示例图
大鼠外周血Treg细胞流式染色
示例图
在小鼠中，5％至10％的CD4 T细胞表达CD25，其中几乎全部是Foxp3 ，不过还是有少量表达Foxp3的细胞存在于CD4 CD25-T细胞中。
Foxp3Treg定义为CD3＋、CD4＋、CD25hi、CD127lo、Foxp3＋，如果要分选的话，可以通过CD25＋CD127lo来圈出Treg细胞，分选出培养、进行抑制性实验，不过这样分选的细胞中可能会混杂一些效应T细胞。
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