今天我们来了解流式细胞仪检测的数据如何呈现给我们呢?这里就不得不说两个重要的概念:各个通道的调节电压或者增益和线性/对数测量。
我们回忆哈检测细胞或者微粒经过测量池时,激光进行照射,FSC,SSC还有不同的荧光通道会接受不同的细胞或者微粒信息,因为细胞颗粒和数量的限制,所接收到的光信号会比较微弱,这样就需要一个装置将信号放大或者最好可调节到我们需要的大小(这就是我们前面提到的PMT,APD,PD)硬件装置了,体现在我们操作软件上就是调节各个通道的电压或者增益值了。
各个通道检测的信息有的和呈现的数据呈现线性关系,这样就选用线性关系体现。荧光检测过程中因为细胞的自发荧光和特异性荧光信号差异很大,微小的荧光变化导致监测到的电压就变化很大,这时候对数测量体现出了极大的优势,能让结果更可能多的体现出来。
一般前向及侧向散射光信号因为变异范围较小,故使用线状放大;而荧光信号变异范围较大所以多使用对数放大。比较特殊的是DNA分析时,荧光信号使用线性放大,这是因为需要维持荧光信号和DNA含量的正比关系,便于后续的分析。
线性放大和对数放大示意
现在越来越多的厂家将数据都数字化存储,线性和对数放大的选择也可以在数据展现的时候再来选择。各个通道的电压也可以自动调节至相对合适的状态。这些技术上的改进,极大的简化了使用者的操作,为流式细胞技术的推进和普及提供了便利,给科技点赞。
朋友们,今天就到这里。小白侃侃和各位一起成长,加油!