第一章 概述
一、天麻的种类与分布
天麻属（Gastrodia）植物为兰科多年生腐生草本。天麻种类很多，全世界有20余种。
我国有5种。即天麻（G．elata）、原天麻（G. sndusta）、细天麻（G. gracilis）、南天麻（G.lavanica）、疣天麻（G.tuberculata）。其中细天麻、南天麻仅见于台湾。疣天麻仅见于云南省中部地区，系野生种。
天麻主要分布于云南、贵州、四川、重庆、湖北、陕西、河南、安徽、河北、山东、吉林等省（直辖市），以长江两岸山区最多，云南属于中国六大产区之一，云南又主要集中在昭通市。
天麻古代尚有"离母"、'鬼督邮"、"神草"、"阎狗"、"合离草"、"独摇芝"、"赤箭脂"、"定风草"、"白龙皮"、"赤箭根"、"龙皮"、"独摇"、"赤箭芝"、"明天麻"等名称。尚记载有"木浦"、"定风草"、"水洋芋"、"山土豆"、"冬彭"等各地的俗称。在云南昭通市称"天麻"，亦有人称"水洋芋"。苗族语称"稿朗锐"(音释)，意思是具有马尿气味味的"苕儿"。现代有关天麻的著作均以"天麻"作为本品正名，以"赤箭"作为本品异名
二、天麻性味功能
天麻以治疗眩晕头痛、惊厥抽搐、四肢麻木、风湿、体痛、语言不遂、血脉不通、痰痛气阻等症见长，故有"三抗"、"三镇"、"一补"之说。即抗癫痫、抗惊厥、抗风湿、镇静、镇痉、镇痛、补虚等作用。此外天麻多糖还具有促进机体DNA、蛋白质合成、抗衰老和提高机体免疫力的作用。东汉《神农本草经》云：味辛，温。主*鬼精物，蛊毒恶气。久服益气力，长阴肥健。明，李时珍著《本草纲目》云：天麻，乃肝经气分之药。《素问》：诸风掉眩，皆属风木，故天麻入阙阴之经而治诸病。罗天益云：眼黑头旋，风虚内作，非天麻不能治。天麻乃定风草，故为治风之神药。今有久服之遍身发出红丹者，是其祛风之验也。天麻是我国名贵最常用中药，也是云南著名地道药材，历版《中国药典》均予收载。
三、昭通天麻的历史
《彝良县志》记载："清乾隆五十年(1785)四川宜宾知府派人来(彝良)小草坝采购天麻给皇帝祝寿。
清末杨履乾等编撰的《昭通志稿》卷九，在药之属就记载；"天麻，形如黄瓜，味辛麻，治风痹"。
曾育麟1956年报道："云南昭通专区一带天麻多生于高山密林中，以镇雄县产量最高，小草坝所产质量最好"。
郑虎占等主编的《中药现代研究与应用》记载："传统认为天麻主产我国西南诸省，东北、华北也有分部，以云南昭通产者最为著名"。
马成广主编的《中国土特产大全》记载："云南是我国天麻主产地之一，集中产于昭通地区的镇雄、彝良、威信、大关、盐津、绥江、永善等县，以彝良、镇雄为最多。此外，怒江、丽江、中甸等地也有出产。云南天麻个大，肥厚、饱满、色黄白，明亮，呈半透明状，质坚实，无空心，品质优良，称为云天麻，畅销国内外"。
周铉等《天麻形态学》记载："惟就今所知，在我国西南山区，由于自然条件优越，野生天麻繁多，历史上就形成若干个商品天麻的产区。其中以云南省东北部（即昭通市）所产乌天麻……具花芽的球茎含水量特别低，加工成的商品麻在国际市场上享有很高的声誉"。
胡世林《中国地道药材》记载："天麻主产于我国西南诸省，东北、华北亦有分布，云南昭通产者最为驰名"。
余嘉华《云南风物志》记载："云南是我国天麻的主要生产地之一。怒江州、迪庆州、丽江地区均产，以昭通地区最多，彝良、镇雄是中外闻名的天麻产地，所产天麻个大、肥厚、色黄白、呈半透明状，质坚实，是云南天麻的代表"。
从上述资料足以说明昭通天麻应用历史悠久，贡麻之称有来由。
自60年代开展人工种植天麻以来，历届市委、市政府高度重视天麻资源的开发利用。2002年5月昭通市委、市政府把天麻列为全市"八大优势农产业"之一。2005年6月7日，国家质量监督检验检疫总局和国家标准委批准发布了《原产地域产品 昭通天麻》国家标准。2007年8月21日，昭通天麻证明商标获国家工商总局商标局正式核准。2008年10月，昭通天麻证明商标标识正式投入使用，产品供不应求。2012年4月成立了昭通市天麻特产局和昭通市天麻研究院。所有这些都为昭通天麻产业发展争取更多的政策和资金支持，为发展壮大天麻产业提供了千载难逢的发展机遇。
四、昭通天麻植物形态
据周铉教授在昭通天麻产区十多年的调查，证实昭通野生天麻原植物为兰科天麻属植物乌天麻、黄天麻、绿天麻。三者在花和花茎的颜色上均有明显差异，即使栽培在一起，也很容易区分。
乌天麻（Gastrodia elata Bl.f.glauca S.chow） 花及花茎灰乌色，植株较大，最高可达2m，成体球茎含水量在60%～70%；块茎多呈宽卵形、卵形、椭圆形；
绿天麻（Gastrodia elata Bl.f.viridis Mak） 花及花茎淡蓝绿色，植株较小，一般在1m左右，成体球茎含水量在60%～70%；块茎多呈宽卵形、卵形、椭圆形；
黄天麻（Gastrodia elata Bl.f.flavida S.chow） 花及花茎淡黄绿色，植株较大，最高可达2m，成体球茎含水量在60%～70%；块茎多呈宽卵形、卵形、椭圆形；
以上三种天麻叶为退化的膜质鳞片，基部呈鞘状包茎。总状花序长30～40cm，通常开花30～60朵，每朵花的基部有一膜质苞片，花黄绿色，花梗长2～3mm；萼片与花瓣合生成歪斜的花筒，顶端5枚裂片，外轮萼片3枚，内轮两枚花瓣裂片着生于中萼及侧萼之间，在花筒基部长出的花瓣为唇瓣，顶端3裂，中裂片舌状，边缘呈流苏状，侧裂片直立，褶片状，基部有一对肾形的胼胝体。蕊柱由雌蕊和雄蕊合生而成，花药着生于蕊柱顶端，花药二室，花粉块黄色，在蕊柱顶端前方有一圆形的蕊喙，有两个能育柱头，侧生于唇瓣及蕊柱基部。子房下位，倒卵形。蒴果倒卵状椭圆形，成熟时由缝线处开裂。种子呈纺锤形，平均长0.97mm，直径0.15mm。种子由胚及种皮构成，无胚乳。
第二章 生物学特性与适宜区分析
一、生物学特性
（一）生长发育特性
天麻是兰科植物中比较特殊的植物，无根，无绿色叶片，只有块茎、地上茎、花和果实。即天麻既不能以根吸收水和无机盐等养料，又无绿叶制造葡萄糖养料，必须通过共生的蜜环菌提供养分才能生长。正由于天麻无根、无绿色叶片，其块茎常年潜居于土中，是典型的异养植物，故天麻与蜜环菌之间存在着极为特殊的关系，天麻生长的基本营养来源于蜜环菌，没有蜜环菌天麻不能生长。并在一定时期内，表现为天麻对蜜环菌的寄生；在另一时期内，则表现为蜜环菌对天麻的寄生。在生产中，必须采取一定措施，控制这种关系，方可获得高产。天麻多生于中高山区，海拔800～2200m的林下阴湿地带，尤多生长在海拔1400～1700m高山冷凉潮湿环境。在低山区由于夏季气温高，对天麻和蜜环菌等的生长均不利，而太高山地因气温过低也不适宜。天麻虽能在高海拔的地方生长，但局部地形的坡度一般不宜很陡，以缓坡为宜。同时，其坡向还需向阳，以满足天麻生长对热量的需要。另外，研究发现紫萁小菇等萌发菌与天麻的有性繁殖有关，证明萌发菌能提供营养，可供天麻种子发芽。
天麻是与真菌共生为主要营养来源。天麻种子必须由小菇属（Mycena）一类真菌菌丝侵染种胚获得营养而萌发，故称这类真菌为天麻种子萌发菌。天麻种子发芽后，当蜜环菌侵入原球茎分化出的营养繁殖茎后，萌发菌和蜜环菌（Armillariella mellea）可同时存在于营养繁殖茎的不同细胞中，对天麻的营养作用逐渐被蜜环菌代替，直至生长成初生块茎（米麻、白头麻）和次生块茎（箭麻）。其次，由天麻表皮的渗透作用，可从土壤中摄取氮、磷、钾等营养物质。
自然条件下昭通天麻生长发育观察：花茎于5月上旬～6月上旬生长出土，6月上旬～6月下旬开花，7月上旬～7月下旬种子成熟。
天麻块茎于4月中旬萌发生长，并形成营养繁殖茎，具有同化蜜环菌，输送养分和繁殖功能。5月份其顶芽和侧芽开始膨大，6～9月高温季节生长加快，10月随气温降低，生长缓慢，11月上、中旬停止生长进行休眠。块茎生长具有多级分枝和顶端优势特性。
天麻有性繁殖：7、8月份种子成熟播种，30天后，可观察到长0.8mm，直径0.49mm的原生块茎，亦称原球茎。播种后30～40天长出营养茎。营繁茎顶芽和侧芽的前端迅速膨大生长成初生块茎。11月上、中旬随气温降低休眠。次年，初生块茎越冬后于4月份萌芽生长，当年可生长成具花茎芽（混合芽），个体大，营养丰富的次生块茎和个体较小的初生块茎。由种子播种至生长成次生块茎历时一年半。次生块茎可加工入药和越冬后做有性繁殖的种麻，初生块茎越冬休眠后做无性繁殖的种麻，可春种冬收。第三年，由次生块茎的花茎芽，于4月份萌芽生长成花茎，并由块茎贮存的养分供给开花结果。至此，历时两年半，完成天麻由种子到种子的个体生长发育。
（二）生态环境要求
天麻与蜜环菌共生，营养方式等不同于一般植物，有其独特的生物学特性，其生长发育与环境条件关系密切。
（1）温度：一般年平均温度3～11.6℃，生育期温度在15～27℃。气温升至6℃以上时蜜环菌开始生长，升到12～15℃以上时天麻开始萌动生长或抽茎出土。气温达16～20℃时现蕾，19℃时开花结实，19～22℃时种子成熟。18～26℃时蜜环菌和天麻块茎生长最快，低于12℃或高于30℃，蜜环菌生长受到抑制，天麻生长缓慢。温度降到10℃以下停止生长，进入休眠期。并与湿度关系蜜切，一般年降雨量在1000mm左右，空气相对湿度70%～80％。
（2）光照：天麻是一种根、叶均退化的兰科植物；完全失去了进行光合作用的生理机能。它生长发育所需要的营养物质，是与萌发菌和蜜环菌共生而获得的，因此，它的块茎生长不需要光照。光照只能起到为它提供热量的作用。故有的地方天麻在无光照的室内进行栽培。
（3）土壤：天麻多生长在林下腐殖质层中，土壤以疏松肥沃、保温保湿、通气排水、理化性质好的土壤有利于蜜环菌和天麻的生长。天麻一般生长在微酸性的土壤中，土壤的pH值宜5.5～6.5左右。
（4）植被：植被是天麻赖以正常生长发育的极为重要的环境条件。在昭通天麻产区的植被主要有青冈、桦木、栗树、水冬瓜、竹子等；草本则多为禾本科、莎草科植物，以及苔藓、蕨类等。天麻多生长在山区的杂木林区及针阔叶混交林区，森林覆盖度在70％左右。也分布于森林损坏后所形成的竹林、疏林与灌丛中。同生植物主要有青冈、桦木、野樱桃、牛奶子、五倍子及苔藓植物等。
综上可见，天麻主生长于林下阴湿、腐植质较厚、蜜环菌丰富的地方，喜凉爽湿润气候，以土质疏松、排水良好及肥沃并微酸性的砂质壤土或腐植质土为佳。昭通天麻主要生长在海拔1400～2800m处，树林主要植物有青杠、野樱桃、桦树、牛奶子、盐肤木、马桑、栎、蕨类、苔藓等。这些植物为天麻蜜环菌生长创造了荫凉、湿润的良好环境，提供了丰富营养环境。气温在10～15℃时，天麻则开始萌动，20～25℃时生长最快，高于30℃时生长缓慢，10℃以下则进入休眠期。当湿度在75％～80％以上，土壤含水量保持在40％左右及年均降水量1000mm以上时则适宜天麻生长；湿度过大或积水或过分干燥的地方，均不利天麻生长甚至可能自灭。
（三）生活史
天麻在约2年的生活周期中，除有性繁殖时间约70天在地面外，其余全部时间都潜居土中。天麻从种子成熟到播种，再回复到种子，便为一个完整的循环周期。即从种子→原球茎→米麻→白头麻→箭麻（商品麻）→种子的生长发育全过程，为天麻生长发育周期；这个周期最快需要2年，慢则3年或4年，才能完成其全部生活史。如果天麻种子播于菌床里，第一年发芽破出种皮或第一次换头，形成小白头麻或白头麻；次年第二次换头，形成大白头麻或箭麻；第三年，箭麻抽薹开花结籽，白头麻繁殖长出大量的商品箭麻，再用箭麻培育出天麻种子。从上述天麻生活史可见：天麻种子与萌发菌共生萌发，再与蜜环菌共生，生长发育成天麻；天麻块茎上可生长出许多小的白头麻，白头麻上长出新的白头麻，或生长出箭麻，即可得商品麻，箭麻生长抽苔开花结果后便形成种子。
二、昭通天麻原产地
昭通天麻产于我省昭通市，以彝良县小草坝为中心的40平方公里内产的最佳，昭通地处云贵高原与四川盆地的过渡地带，地形为典型的高原山地地貌构成，因受江河切割，地势陡峻，山高谷深，整个地势西南高，东北低，向北倾斜。最高海拔4040米，最低海拔267米。乌蒙山脉和五莲峰山脉横踞其中，成为昭通市中部的一道屏障，把全市分为两部分。全市海拔1000米以上地区具有南温带、中温带和北温带的气候类型。主要气候特点是四季不明显，雨热同季，冷凉寡照。因受西南暖湿气流及北方西伯利亚冷空气交汇的影响，形成具有独特气候特征的"昆明准静止锋"。由于受昆明准静止锋的影响，冷暖气流常滞留于屏障之北，造成东北部经常阴雨绵绵，雾气沉沉，冷湿寡照，为天麻生长提供了最适宜的生长环境。
第三章 天麻两菌及种子
一、萌发菌生物学特性及生长习性
天麻种子萌发菌属小菇属的4种真菌是紫萁小菇（Mycena osmundicola）、兰小菇（M orchicola）、石斛小菇（M dendrobii）、开唇兰小菇（M anoectochila）。紫萁小菇用于天麻生产较早，石斛小菇伴播天麻种子发芽率最高。
（一）形态特征
1. 紫萁小菇
菌丝半透明，镜下观察无色透明，有分隔。子实体散生或丛生。菌盖发育前期呈半球形，后平展，灰褐色。菌褶白色，离生，放射状排列。菌柄长0.3～3.10cm，粗0.6cm。孢子无色光滑椭圆形。
2. 石斛小菇
菌丝白色，担子果高5～22mm，单生。菌盖直径3～6mm，帽状或伞状。菌褶近直生、光滑、白色。菌柄中生、细长、中空，3～19×0.5～1mm。担子棒状17.5～22×5～7.5μm，4孢，无色。孢子椭圆形。
（二）生长发育特性
1. 菌丝和子实体的生长发育
将感染了萌发菌的菌叶，置培养皿中保湿在海绵上，在25℃恒温培养40天左右，在白色菌丝丛中分化菌蕾，2～3天后发育成菌蕾，3～6天后菌盖平展，菌柄伸长，子实体发育成熟。
小菇属萌发菌属于真菌，其菌落、菌丝形态特征相似，菌落规则，菌丝白色、气生菌丝发达，锁联合明显，菌丝生长旺盛，以石斛小菇生长最快。
2. 腐生
这类真菌多腐生在高山林间落叶上，对纤维素有很强的分解能力，地面上的枯枝朽叶，感染这类真菌而被分解。天麻种子落在林地染此菌的树叶上，可侵入天麻种子使其萌发，故小菇属萌发菌主要营腐生生活，兼性寄生。
3. 好气
萌发菌好气，主要分布在林间透气性较好的枯枝落叶层和表层土壤中。
4. 其他
萌发菌对天麻块茎无侵染能力，只侵染天麻种胚基部细胞。
（三）生长习性
1. 温度
萌发菌在15℃～30℃温度范围内均能生长。以25℃菌丝生长最快，低于20℃或高于25℃菌丝生长速度减慢。
2. 基物含水量
一般适宜含水量为基物重量的60%～70%，含水量过高萌发菌生长速度减慢，甚至停止生长。
3. PH值
最适宜的PH值为5.0～5.5，碱性条件不利于菌丝生长。
4. 营养条件
木屑与麦麸皮体积比为3：1的培养基适合萌发菌生长。萌发菌喜欢以阔叶树树叶、葡萄糖为碳源，蔗糖和麦芽糖的利用效果差；氮源则以麦麸为佳。
二、 蜜环菌生物学特性及生长习性
（一）蜜环菌形态特征
菌丝体，是由菌丝分枝交错形成，是此菌的基本结构。菌丝体又分菌丝和菌索。初生菌丝乳白色，镜下观察无色透明，有分隔。菌索是由无数菌丝结合在一起的根状物、幼嫩时为棕红色，有白色生长点，衰老时为黑褐色至黑色，无再生力。
子实体丛生，菌盖肉质，扁半球形至平展，直径3～11cm，蜜黄色；菌柄圆柱形：长4～12cm，直径0.5～1.5cm；菌环上位；孢子椭圆形，无色透明（见上图）。
（二）生长发育特性
1. 菌丝和子实体的生长发育
子实体成熟后释放孢子于地面，在温湿度适宜条件下萌发出初生菌丝，进而转为次生菌丝和菌索。菌索表面有鞘包着，是蜜环菌适应不良环境的特殊结构，菌索有很多分枝，向周围蔓延生长，寻找营养，故它在林间分布广泛，在10月低温、高湿的环境下可长出子实体，又释放出担孢子。
2. 腐生，兼性寄生
多腐生在林间的枯枝落叶上，又可寄生在活树上。
3. 好气
在通气良好的条件下，才生长旺盛。
4. 发光
蜜环菌菌丝和幼嫩的菌索在黑暗处会发出荧光。
（三）生长习性
1. 温度
蜜环菌生长的温度范围为6℃～30℃，最适生温度为25℃，超过30℃菌丝停止生长。
2. 湿度
蜜环菌适宜多雨湿润的土壤，大气相对湿度为80%～90%。
3. 光线
蜜环菌生长一般不需要光线，光照对蜜环菌生长有抑制作用。
4. 酸碱度
适宜的酸碱度为pH5～6。
5. 适宜的树种
多种阔叶树适宜蜜环菌生长，但以壳斗科的青冈、板栗、槲栎等，与蜜环菌有很好的亲和力，最适宜蜜环菌生长。
三、萌发菌、蜜环菌的培养
萌发菌、蜜环菌的培养必须在无菌条件下进行，需要的常用设备有：接种箱或超净工作台、接种工具、恒温培养箱、菌种培养架；高压蒸气灭菌锅、电热干燥箱，紫外灯；菌种保藏箱，试管、天平等。
需要的化学药品有：磷酸氢二钾（K2HPO4），磷酸二氢钾（KH2PO4），硫酸镁（MgSO4.7H2O），葡萄糖，蔗糖，维生素B1，石膏粉，琼脂，0.1%氯化汞（HgCl），75%酒精，甲醛，高锰酸钾等。
萌发菌和蜜环菌的生长都需从基质中摄取碳源、氮源、无机盐等营养物质而生活。所用的培养基将满足其营养需要。
（一）萌发菌、蜜环菌一级菌种（母种）培养
1.分离材料的选择与收集
（1）蜜环菌分离材料：
菌索：可在林间树桩和枯树根等处采集棕红色的野生蜜环菌菌索，用靠近白色生长点生活力强的幼嫩部位为分离材料。
子实体：可在晚秋多雨季节，蜜环菌子实体出土时，采收新鲜、形态完整、健壮、无病虫为害、将要成熟的蜜环菌字实体。
孢子：采集即将成熟的蜜环菌子实体，对其产生的孢子进行萌发分离。
（2）萌发菌分离材料：
小米麻：刚刚在野外条件下萌发的小米麻。
子实体：采集野外生长的小菇属萌发菌子实体。
孢子：采集即将成熟的萌发菌子实体。对其进行孢子分离。
2.分离技术
（1）PDA培养基制备：去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、自来水1000ml、pH5～6。将马铃薯切片，加水煮沸30分钟，用纱布过滤，取滤液1000ml并放入琼脂加热，使之全部深化，最后加入葡萄糖。然后将培养基趁热分装于试管内，经高压灭菌（1.5kg/cm2）30分钟。取出后按25度斜度放置冷却后接种。
（2）消毒灭菌：接种室灭菌，按每平方米用量计算：40%的甲醛溶液8ml，高锰酸钾5g进行熏蒸。先关闭窗户，取甲醛溶液装入容器中，再放入高锰酸钾，人随之离开接种室，关闭房门，熏蒸1小时即可。熏蒸后应隔1天使用。
接种时，先将各种器具放入接种室内，开启紫外灯灭菌30分钟后即可工作。超净工作台或接种箱开启紫外灯灭菌30分钟后，再进行操作。
（3）分离方法
① 组织分离：
蜜环菌：将蜜环菌索或蜜环菌子实体用水洗净表面泥土，然后切取需要的部份组织，用无菌水冲洗3次，放入0.1%升汞溶液浸泡1分钟；再用无菌水冲洗3次，洗去残存的药液，置于无菌培养皿内。将菌索分别剪成1cm长的小段或小块，用灭菌滤纸吸去表面附着水液，然后接种于斜面培养基上，置25℃恒温培养，3～7天左右，开始分别长出白色菌丝和菌索。分离子实体时，用无菌水冲洗消毒残存药液后，用灭菌滤纸吸净水珠，再用解剖刀从菌盖中纵向剖开了实体，在菌柄及菌盖交界处取其0.5cm的一块组织置于PDA培养基上培养。
萌发菌：将小米麻或萌发菌子实体用水洗净表面泥土，然后切取需要的部份组织，用无菌水冲洗3次，放入0.1%升汞溶液浸泡1分钟；再用无菌水冲洗3次，洗去残存的药液，置于无菌培养皿内。用灭菌滤纸吸去附着在小米麻上的水液，用无菌镊子捣碎小米麻，然后把捣碎的汁液接种于斜面培养基上，置25℃恒温培养，3～7天左右，开始分别长出白色菌丝。分离子实体时，用无菌水冲洗消毒残存药液后，用灭菌滤纸吸净水珠，再用解剖刀从菌盖中纵向剖开了实体，在菌柄及菌盖交界处取其0.5cm的一块组织置于PDA培养基上培养。
② 孢子分离：萌发菌和蜜环菌的分离方法相同，即将开伞的子实体截去菌柄的下半部，用75%的酒精在菌盖表面及菌柄部分进行揩擦消毒，然后菌褶向下插在孢子收集装置的支架上。将支架放于无菌培养皿中，用钟罩或大烧杯罩住以收集孢子。孢子落于皿内后，用接种针挑取少许，接于斜面培养基上培养。
3.菌种纯化培养
在培养基上最初分离出的菌种，再进行提纯培养以得到优良菌种，称作纯化。萌发菌选用菌落生长速度较为一致的菌丝体，用消毒的接种铲连同培养基一起切取菌丝，转移到新的培养基上培养，重复转接可获纯菌种。蜜环菌在培养基上接种点处刚产生菌索分枝时，选择其中生长旺盛而幼嫩的菌索，用接种铲截取长2～3mm移入斜面培养基上，在25℃恒温下培养，菌索长满培养基后即为纯化的一级菌种。
（二）萌发菌、蜜环菌二级菌种（原种）培养
1.萌发菌二级菌种培养
培养基成分：青冈、板栗等阔叶树的木屑77%、麸皮15%、玉米粉5.45%、蔗糖1%、石膏粉1%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.25%，将培养料的含水量调至65%左右。然后装瓶，在瓶中心打直径1cm的圆孔，深达培养基2/3处。盖好瓶盖，高压蒸气灭菌（0.1～0.15兆帕压力，121～126℃）2小时，冷却后接种。在接种室内，将菌丝连同约蚕豆大小的母种，接于培养基的圆孔中，一支母种可接原中5瓶左右，盖好瓶盖后置25℃培养室培养。
2.蜜环菌二级菌种培养
配方1：玉米芯粉30%，锯末50%，麦麸19%，蔗糖1%，小树枝段。
配方2：阔叶树锯末70%，麦麸30%，小树枝段。
配方3：小树枝段加清水。
制作时，先将手指粗的树枝截成长1.5cm的小段，在水中浸泡10小时左右，使树枝段充分吸水，然后将上述原料按比例充分混合、用水调含水量60%左右，装入500ml菌种瓶中，每瓶装入树枝段50～60段，以瓶容量的4/5为宜，再加水少量，盖瓶盖后高压灭菌（0.1～0.15兆帕压力，121～126℃）2小时。冷却至25～30℃，接入母种，置于25℃恒温培养，30天～45天可长满全瓶。
（三）萌发菌、蜜环菌三级菌种（栽培种）培养
1.萌发菌三级菌种培养。
