虽然是选修,但也是最好拿分的
而且主要是总结和记忆的内容
简而言之,背就vans了
课题1:微生物的实验室培养01
培养基与微生物
1、培养基一般可分为固体(加了凝固剂,如琼脂)
液体培养基,but一般都含有水、无机盐、碳源、氮源
2、再就是有些微生物名堂多,要满足它的ph、特殊营养物
如:
乳酸杆菌要加维生素
霉菌的PH为酸性
细菌PH为中性或微碱性
02
无菌技术
主要有两种
1、消毒(不*死芽孢和孢子)
煮沸消毒法:100℃煮5-6min
巴氏消毒法:70-75℃煮30min或80℃煮15min
2、灭菌(可*死芽孢和孢子)
灼烧灭菌(就是用酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧)
干热灭菌,要用干热灭菌箱
高压蒸汽灭菌(一般用于培养基的灭菌,要用高压蒸汽灭菌锅)
最后,实验室可用紫外线或化学药物消毒
紫外线照射前,喷点石炭酸或煤酚皂溶液效果更好
03
实验操作
- 制备牛肉膏蛋白胨培养基
生物选修一课本p16自个儿看,就几个细节
如:
加热熔化琼脂时,不断用玻璃棒搅拌,防止琼脂糊底而导致烧杯破裂
- 倒平板
几个步骤就不说了,讲一下会考的
1、平板冷凝后,为什么要将平板倒置?
①防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染
②避免培养基水分过快挥发
2、培养基灭菌后,需要冷却到50℃左右时
才能用来到平板,用手触摸来估计温度
3、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?
灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基
4、如果皿盖和皿底之间有培养液溅到,还可以用吗?
不能,因为微生物会在皿盖与皿底之间的培养基上生长
- 菌落
- 平板划线法
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作
将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
具体步骤看课本
该方法不能用于计数,适用于好氧菌
划线时,注意不要将最后一区的划线与第一区相连
将平板倒置放入培养箱中培养,防止菌落蔓延,便于形成单个菌落
划线之前都要灼烧接种环,是防止杂菌污染
每次划线后,仍要灼烧接种环
是*死上次划线结束后接种环上残留的菌种
- 稀释涂布平板法
稀释,后涂布平板,可用于微生物计数
具体操作看课本p19
04
菌种保藏
临时保藏,采用斜面保藏,置于4℃的冰箱
长期保存,采用甘油管藏
课题2:土壤中分解尿素的细菌的分离与计数尿素【CO(NH2)2】并不能直接被农作物吸收
要用脲酶分解成氨才能被植物吸收
01
微生物的筛选
人为提供有利于目的菌株生长的条件
(包括营养、温度、PH等)
同时抑制或阻止其他微生物生长
- 选择培养基
将允许特定的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类的微生物生长的培养基
例如:
要从土壤中分离出尿素分解菌,就要使用以尿素为唯一氮源的培养基
- 统计菌种数目
1、采用稀释涂布平板法
2、一般选择菌落数在30-300的平板进行计数,选三个数据
(如果一个数据与另外两个数据相差太大,如31,270,289,则该组数据的准确度不高,误差较大)
3、注意:
统计的【菌落数】往往比【活菌数】低
即【菌落数】<【活菌实际数目】
因为当两个或多个细胞连在一起时
平板上观察到的只是一个菌落
还有就是【显微镜计数法】也常用于测定微生物数量
- 大肠杆菌使用滤膜法计数
每克样品中的菌株数=(C÷V)×M
C代表某一稀释度下平板的平均菌落数
V代表涂布平板时使用的稀释液的体积(mL)
M代表稀释倍数
- 设置对照
1、主要目的:
排除实验组中非测试因素对实验结果的影响
提高实验结果的可信度
2、如何设立对照,以及目的
①在适宜的环境下培养空白培养基
判断培养基中是否有杂菌污染
需要将未接种的培养基同时进行培养
②判断选择培养基是否具有筛选作用
需同时设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养
观察两种培养基上的菌落数目
通过对比得出结论
03
样品的稀释
测定土壤中细菌的数量,10*4,10*5和10*6倍
放线菌,10*3,10*4,10*5倍
真菌,10*2,10*3,10*4倍
计算的话题目会给稀释倍数
但有时候他直接问
应该选取哪种稀释倍数
04
微生物培养与观察
细菌,30-37℃,1-2天
放线菌,25-28℃,5-7天
霉菌,25-28℃,3-4天
可以每隔24h统计一次
选取菌落数目稳定的数据作为结果
防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目
一般来说,在一定的培养条件下
(相同的培养基,温度及培养时间)
同种微生物表现出稳定的菌落特征,包括形状,大小,颜色等
标记培养皿时,应注明培养基种类,培养日期以及样品稀释度等
在以尿素为唯一氮源的培养基加入【酚红指示剂】,如果ph升高,指示剂将【变红】,则培养的样品中含有分解尿素的微生物
05
滤膜法
测定饮用水中的大肠杆菌数目,采用【滤膜法】
用伊红美蓝培养基
(要加入伊红美蓝,以及凝固剂如琼脂)
在该培养基上,大肠杆菌的菌落为【黑色】
以上都要背,都要背,背