单分子检测名词解释,名词解释分子生物学检验技术

首页 > 教育 > 作者:YD1662024-04-06 06:06:36

自生物标记物纳入AD诊断框架以来,国内很多生物医药企业针对基于tau-217等血液标志物开展AD早期诊断产业链相关产品研发工作,仁迈生物、安群生物等国内企业的多款产品已获批上市,苏州仁端等企业研发的AD血液标志物相关抗体原材料也打破外国垄断获得市场认可。目前生物医药企业主要围绕单分子检测技术、免疫沉淀-质谱 (IP-MS)、MSD电化学发光技术等技术平台开展产品线研发。

单分子检测技术 (Single Molecule Detection,简称SMD)是指在单分子水平上通过生物分子的构象变化、动力学、分子之间相互作用以及对单个分子进行操纵等方式进行检测,是一种适用于单分子水平上探求分子的基本物理和化学原理的独特技术,一种新型的超灵敏检测手段。目前比较成熟并投入商用的主要为SimoA技术,该技术基于微阵列芯片的单分子免疫检测,是在毫米级芯片上雕刻(或浇筑)成千上万个微米级微井,每个微井体积约40 fl左右,随后将免疫复合物磁珠分配于微井中,再借助高分辨率荧光显微镜对荧光点进行计数,依据泊松分布理论,计算同时含珠子与荧光产物孔的数量/含珠子孔总数的比值,以此确定测试样品中的蛋白质浓度。

免疫沉淀-质谱 (IP-MS)的原理是利用特异性抗体与目标蛋白结合,将其与其他相互作用伴侣共同沉淀下来,再用质谱技术检测沉淀物中的蛋白成分,该方法的关键在于选择合适的抗体,以确保沉淀物中仅含有目标蛋白质及其相互作用。通常该技术分为两种类型:单一免疫共沉淀和串联免疫共沉淀,单一免疫共沉淀是指抗体与目标蛋白质结合后,直接进行质谱分析;而串联免疫共沉淀则是在单一免疫共沉淀的基础上,将沉淀物再次进行免疫和质谱分析,以筛选出更加特异性的相互作用。

MSD电化学发光技术是基于Elisa原理的升级,在96/384微孔板(石墨材质,背面带有电路)的板底包被捕获抗体,加入待测样本,加入三联吡啶钌标记的检测抗体,形成双抗体夹心复合物,将微孔板放入MSD仪器中,微孔板通电后,三联吡啶钌发生化学反应,由[Ru(bpy) 3 ] 3 变成[Ru(bpy) 3] 2 ,再回到[Ru(bpy)3]3 ,并且这个循环反应可以持续进行,在此过程中会释放出光子(620nm检测)被仪器中的CCD相机捕获,释放出的光子和待测物的浓度成正比。

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