都说一千个读者就有一千个哈姆雷特，文学艺术的赏析本身就是一件带有很强主观性的事，一批批的观画者对《蒙娜丽莎》有着各种各样的鉴赏，而尤其是画作中那一抹似笑非笑的表情，一直以来都维持着很高的讨论热度。
有人观画后隐约感到画中人在微笑，但仔细看时又觉得笑容消失殆尽，在艺术家高超的技艺下，呈现柔和而又神秘的微笑之谜仿佛脱离自然状态而存在，具有独立的生命意义。
从艺术角度的剖析鉴赏只能从构图、色彩、技法、人文思想等方面出发，得到的只有主观性的赏析，但谁都无法说明微笑之谜的答案，因而便有不少人另辟蹊径，从科学的角度出发去研究分析。
曾经有几位医学专家从病理角度出发，提出《蒙娜丽莎》画中人物其实没笑的观点。
尤其是当将画作放大，通过对人物体表细节的观察，医者普遍认为画中人可能由于疾病原因导致发际线、睫毛、眉毛等毛发发育不良。
加之在医生看来，画像中呈现的女性眼白颜色和肤色均非正常状态，种种体表特征都将猜想指向画中人物原型可能患缺碘症。
此病症影响甲状腺功能，进而导致患者胆固醇高，外显症状为发际线后移及浮肿，所以可能《蒙娜丽莎》画中并无所谓神秘的微笑，只是丰满体态下流露的自然无表情状态。
但其实，人文主义思潮下贵族女性脱毛并非新鲜事，当时欧洲贵妇的“无毛脸”流行形象也普遍出现于同一时期绘画作品当中。
而对于画作中人物肤色和眼球颜色的争议，猜想画中人物原型患病是一种可能，与油画本身特殊材质在漫长岁月的存放下变色也有很大关联。
另外，据史料记载，达·芬奇创作《蒙娜丽莎》时，对入画模特的心理进行过细致研究。
写生过程中，由于担心时间太久导致入画模特忧郁倦态，还以邀请弹唱乐队及小丑娱乐表演等方式，令其保持愉悦的神态，可见微笑正是画家想要打造的视觉效果。
在画家长时间创作时间下，人的情绪不可能永久性地保持愉悦微笑，再加上画家独具匠心的渐隐晕涂技法的打造，最终画面呈现效果就成了兼具微笑和忧郁之态的似笑非笑，甚至显露出一丝东方宗教气息的神性光辉，梦幻而又神秘。
综合来看，从文艺角度分析，《蒙娜丽莎》是艺术家高超技艺和先进思想的集中体现，在文艺鉴赏的灵活主观性下，微笑之谜的诠释五花八门，言之有理即成立。
从科学角度出发，虽然医者猜想具备一定文献数据和专业学术报告支撑，但仅凭这些却也并不能成为准确判断微笑之谜真相的有力证据，至今这些说法也仍未成为主流认知。
