金检机工作原理,金检机国家标准

首页 > 经验 > 作者:YD1662022-11-01 00:19:45

抗原初次进入机体后,经过一定的潜伏期产生浆细胞并合成分泌抗体。最早出现 的是 IgM,但该抗体维持时间短、浓度低、亲和力较低,在血中持续数日至数周, 是急性期感染的诊断指标;在 IgM 接近消失时,IgG 的含量达到高峰,IgG 产生 晚,但浓度高、维持时间长、亲和力高,血清 IgG 阳性提示感染中后期或既往感 染,当数月乃至数年再次接触相同抗原时,最初原抗体量稍有下降,可能是由于 一部分原有抗体被再次进入的抗原所结合,从而暂时降低了抗体含量,但短期内 抗体含量迅速增加,可能比原来抗体含量高数倍至数十倍,以 IgG 为主,在体内 持续时间也长,IgM 很少增加。

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本次疫情中,通过研究者对 COVID-19 患者进行研究发现,病毒侵入人体后,IgM 抗体大约需要 5~7 天产生,IgG 抗体在 10~15 天时产生。2020 年 3 月 4 日,国家 卫生健康委员会发布了最新版本的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》 在原有诊疗方案的基础上增加了血清学检测,作为确诊病例和疑似病例的诊断依 据之一。血清学检测便是通过检测血液样本中的特异性抗体 IgM 和 IgG 的存在及 含量,来间接判断体内有无病毒及病毒感染情况。目前临床中常用的抗体血清学 检测方法有 3 种:酶联免疫吸附试验法、化学发光免疫分析法、胶体金免疫层析 法。

 酶联免疫吸附法(ELISA)

ELISA 是一种结合抗原、抗体特异性反应和酶对底物高效催化作用的高敏感性免 疫学实验技术。测定时,受检的标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗 涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入 酶标记的抗原或抗体,也通过反应结合在固相载体上。固相上的酶量与标本中的 受检物质的量成比例。加入酶反应底物后,底物被催化成有色产物,产物的量与 标本中受检物质的量直接相关。所以,可根据呈色的深浅进行半定量或定性分析。 该检测方法灵敏度较高,载体标准化难度较低,但检测速度慢、易污染、步骤较 为繁琐。在实际应用中,需要根据抗原抗体的特性设计不同的检测法,目前有双 抗体夹心法、免疫抑制法、竞争法、直接法&间接法等类型。

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 胶体金免疫层析法

是以胶体金为示踪标志物,应用于抗原抗体检测的一种新型免疫标记技术,氯金 酸(HAuCl4)在还原剂作用下,可聚合成一定大小的金颗粒,形成带负电的疏水胶 溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态,故称胶体金。胶体金试纸,是将胶 体金标记的生物大分子在 PVC 材质的试纸固定,留加样孔,并设检测线和质量控 制线。在加样孔上加入样品后,再滴加液体介质,试纸上进行层析。根据试纸上 的免疫反应发生结果,即胶体金位置是否有红色条带出现判断检测结果。

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该方法无需特殊处理标本,仅需一滴血即可在 15 min 内通过肉眼观察获取检测结 果,突破了现有检测技术对人员、场所的限制,缩短检测时间,操作方便快速, 在基层医疗单位及现场检测中广泛使用。目前针对新型冠状病毒,已经报道的有 两种胶体金试纸,一种是检测新型冠状病毒的抗原-双抗体夹心法,另一种是检测 患者血液里特异性针对新型冠状病毒的 IgM 抗体-IgM 捕捉法。在疫情爆发期,需 要大规模做阳性检测时,适合使用总抗检测,同时联卡操作也比较简单,只需要 操作一次,而分开检测需要滴加两次样,用两次卡。

 化学发光免疫分析法

化学发光免疫分析法是将高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相 结合,用于各种抗原、抗体、激素等检测。该法灵敏度高于 ELISA,具有特异性 强、线性范围宽、结果稳定、操作简化等特点,广泛应用于临床标本的检测。但 是该方法对设备、操作、使用环境的要求比较高,使用时需要配套的化学发光仪 器。

抗体检测的灵敏度和特异度

灵敏度反映诊断试验检出感染者的能力,若过低,会出现较多假阴性结果,影响 疾病的诊断、干预和预后,严重可导致患者过早死亡;特异度衡量诊断试验正确 判断非感染者的能力,若过低,则会出现较多假阳性结果,导致医疗资源的浪费, 并造成患者及群众的焦虑和恐慌。因此,具有较高灵敏度和特异度是抗体检测技 术的应用基础。

1.3、不同检测方法优缺点对比

与抗体血清学检测相比,核酸检测能够检测到处于窗口期的患者,及早发现感染 者,是新型冠状病毒检测的“金标准”,但是对检测设备或平台要求较高,高灵 敏度的 RT-PCR 仪价格昂贵,对实验室的洁净度和操作人员要求也较高。此外,核 酸检测耗时较长,考虑到样本运输、样本积压的情况,通常最快 24 小时才可以报 告结果。

与核酸检测相比,抗体血清学检测的血液标本更易获取且标本质量有保证、操作 简单快捷、很大程度上降低了医护人员在标本采集和检测过程中被感染的风险、 更易于基层实验室展开筛查工作等。如果说核酸检测病毒的核糖核酸(RNA), 是病毒存在的直接证据,那么抗体检测的就是患者血液中被刺激产生的抗体,是 间接证据,对临床有提示作用。当核酸检测阴性时,将 IgM 和 IgG 抗体检测增加 进去,可以弥补核酸检测容易造成漏诊的缺点。

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