氯仿的主要用途,氯仿正确使用方法

首页 > 经验 > 作者:YD1662023-05-25 12:01:21

氯仿的主要用途,氯仿正确使用方法(1)

科研是世界的,身体是自己的。进入实验室只是一个起点,而不是终结。希望大家进入实验室之前都学会如何保护自己!

进入实验室只是一个起点,而不是终结。今天,小编就为大家介绍一下分子生物实验室中几种常见的有毒物质以及防护措施,希望能够帮助生物学子在实验室更好的保护自己。

1:溴化乙淀(EB)

溴化乙锭(EB)是一种高度灵敏的荧光染色剂,其含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团,用标准302 nm紫外光透射仪激发能放射出橙红色信号,一般在生化实验室用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后,其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近,使得与DNA结合的染料荧光增强数倍。

氯仿的主要用途,氯仿正确使用方法(2)

由于溴化乙锭可插入DNA的特性,它具有一定的毒性,刺激眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道,严重的可诱导突变并可能致癌。戴好手套和护目镜,穿好实验防护服,在通风橱内小心操作。现在实验室中还有许多溴化乙锭的替代品,比如说GelRed、GoldenView等,相对来说比EtBr更安全。还有一些实验室采用先跑胶,然后在小型染色缸内进行染色,也可以减小EB带来的污染。

2:丙烯酰胺(Acrylamide)

聚丙烯酰胺是SDS-PAGE凝胶中的主要成分。虽然现在已经有按比例配置好的丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺溶液卖,但还有很多实验室是买试剂自己配置。不管是溶液还是干粉,我们都得认识到,未聚合的丙烯酰胺是一种潜在的神经毒素,可通过皮肤吸收。丙烯酰胺的危害主要是引起神经毒性,同时还有生殖、发育毒性。有试验显示丙烯酰胺是一种可能致癌物,职业接触人群的流行病学观察表明,长期低剂量接触丙烯酰胺会出现嗜睡、情绪和记忆改变、幻觉和震颤等症状,伴随末梢神经病如手套样感觉、出汗和肌肉无力。具有累积毒性,不容易排毒。因此在称量丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺粉末时,戴好手套和面罩,在化学通风橱内操作,在倒制SDS-PAGE凝胶时也要注意做好防护。聚合的丙烯酰胺是无毒的,使用时也应小心,因为其中可能含有少量未聚合的丙烯酰胺,虽然说是少量,但是相比薯片和咖啡之类的,还是很大量的哦。

氯仿的主要用途,氯仿正确使用方法(3)

3: 二硫苏糖醇(DTT)

二硫苏糖醇(DTT),同三(2-羧乙基)膦(TCEP)一样是很强的还原剂,散发难闻的气味。结构如下图示:

氯仿的主要用途,氯仿正确使用方法(4)

可用作蛋白质的保护剂,用于防止蛋白质内的半胱氨酸被氧化。也可用于SDS-PAGE电泳时样品的添加剂,用于彻底打破蛋白质中的二硫键。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。当使用固体或高浓度储存液时,戴手套和护目镜,在通风橱中操作。另外常用的还原剂还有β-巯基乙醇,是一种具有特殊臭味的无色透明液体,在使用中也要注意防护。

4:苯甲基磺酰氟(PMSF)

苯甲基磺酰氟(PMSF),常用于蛋白质的提取过程中,是胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的抑制剂,可抑制丝氨酸蛋白酶例如胰蛋白酶(trypsin)和胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin),也可抑制半胱氨酸蛋白酶和乙酰胆碱酯酶,是一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂。它对呼吸道黏膜、眼睛和皮肤有非常大的破坏性。可因吸入、咽下或皮肤吸收而致命。戴合适的手套和安全眼镜,始终在化学通风橱里使用。在接触到的情况下,要立即用大量的水冲洗眼睛或皮肤,已污染的工作服丢弃掉。

5: 二乙基焦碳酸脂(DEPC)

DEPC即二乙基焦碳酸酯(diethylpryrocarbonate),可灭活各种蛋白质,是RNA酶的强抑制剂。DEPC是一种潜在的致癌物质,在操作中应尽量在通风的条件下进行,并避免接触皮肤。DEPC毒性并不是很强,但吸入的毒性是最强的,使用时戴口罩,穿戴适当的防护服,最好在通风橱中操作。不小心沾到手上注意立即冲洗。

6:甲醇(Methanol)

甲醇也是生化实验室用的比较多的有机溶剂,具有很大的毒性并易挥发。甲醇的毒性对人体的神经系统和血液系统影响最大,它经消化道、呼吸道或皮肤摄入都会产生毒性反应,甲醇蒸气能损害人的呼吸道粘膜和视力。急性中毒症状有:头疼、恶心、胃痛、疲倦、视力模糊以至失明,继而呼吸困难,最终导致呼吸中枢麻痹而死亡。慢性中毒反应为:眩晕、昏睡、头痛、耳鸣、视力减退、消化障碍。使用时要避免吸入其挥发的汽雾,戴合适的手套和安全眼镜。

部分实验室在配置蛋白胶染色液和脱色液的时候也会用到,可以将甲醇换成乙醇使用。Western包“三明治”的时候也尽量在通风橱中进行,不能仗着自己年轻,以身试毒。

7:酚/氯仿

刚进入生化实验室的小白,应该大部分都经历过用酚/氯仿抽提DNA的历史。之所以把酚/氯仿放在一起,也是考虑到其在生化实验室的广泛使用。

低浓度酚能使蛋白变性,高浓度能使蛋白沉淀。对皮肤、粘膜有强烈的腐蚀作用,也可抑制中枢神经系统或损害肝、肾功。水溶液比纯酚易经皮肤吸收,而乳剂更易吸收。氯仿主要作用于中枢神经系统,具有麻醉作用,对心、肝、肾有损害。如果不小心接触,立即脱去污染的衣着,用大量流动清水冲洗至少20分钟,就医。

仔细通读下来,正在做实验的你是不是觉得自己被这些毒物包围了呢?其实,只要在进入实验室之前对这些毒物有个基本的认识,做实验时仔细认真,做好适当的防护,生物实验室还是相当安全的。

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