上期说到我在做组织的脱水或者说固定的时候，当我完成操作准备上机切的时候出现了塌陷和皱缩的情况，上期大概考虑了是否是固定液的问题，这一期呢，我们千万不能忽视配制固定液或者是蔗糖溶液时所选择溶剂这个因素。
首先呢，我们平常用的溶剂一般有两种，一种是三蒸水，另外一种呢是PBS,用的比较多的PBS基本上都是直接购买的，或者说是买的粉末自己配的，但是我们要注意的一点是PBS的全称呢是叫做磷酸缓冲盐溶液。
比如说我们实验室如果是用在细胞上的话，基本上都是Gibcol的1X PBS，那这个是指多少摩尔浓度的呢？实际上这个1X就是指0.01mol/L的溶液。如果要是用在细胞放外边的话，比如说免疫组化或者免疫荧光的时候，所用到的基本上都是买的PBS粉末，自己配成的PBS溶液。当然啦，我们也可以自己去配制，这个吧，还是比较推荐自己去配置，当然仅仅是用于非细胞的情况下。
为什么呢？首先呢，我们先来看看0.01 mol/L的用于做免疫组化的PBS是怎么配的？NaH2PO4·2H2O：0.2964g；Na2HPO4·12H2O：2.9g；NaCl：8g。再来看一下要是0.01mol/L的PBS用于细胞上的时候的配方：NaCl：8g；Na2HPO4·12H2O：2.9g；KCl：0.2g；KH2PO4·12H2O：0.24g。
然后我们就会发现这两个有点不太一样啊，用于细胞培养的这一个配方的话，为了保证细胞的活性，维持Na/K平衡的，但是免疫组化细胞已经死了，就不需要考虑细胞活性的问题了，只要细胞不变形就没问题了。不管哪一个配方，NaCl都是占主要成分的，其作用还是用来维持渗透压的，而这里边的HPO4/H2PO4是用来维持PH值的。
那就比较好奇了，这个0.01 mol/L PBS是指溶液总浓度呢，还是其中某个离子的浓度？那就随意的计算一下这里边的离子浓度。NaCl：0.13675 mol/L，HPO42-：0.0081 mol/L，H2PO4-：0.0019 mol/L，这就看出来了，其实0.01 mol/L PBS指的就是这里边PO42-的浓度。
那我的实验中眼球脱水或者固定后为什么会出现这种皱缩和塌陷的情况呢？首先考虑到的就是渗透压的问题，那渗透压有没有啥计算公式呢？有计算公式，πV=nRT 或π=cRT （式中π为溶液的渗透压，V为溶液的体积，c为溶液的浓度，R为气体常数，n为溶质的物质的量，T为绝对温度）。但是这种有些麻烦，上网查了一下后，直接记住一句话，渗透压与总离子浓度（摩尔浓度）成正比。
生理盐水的总离子浓度为：0.307692308 mol/L；0.01 mol/L PBS的为：0.3016 mol/L；0.1 mol/L PBS的为：0.5545 mol/L，然后我们就会发现这个与生理盐水的差老远了，我们就不能用这个做免疫组化或者去配多聚甲醛了。那说明浓度是比较高的，那就减少一点NaCl，因为标准的生理盐水的值为：0.307692308。所以我们就可以拟定一下最终的0.1 mol/L PBS的配方为NaH2PO4·2H2O：2.964g；Na2HPO4·12H2O：29g；NaCl：0.78g。如果要是考虑到氯化钠的存在会影响到最终的渗透压的话，可以把这一丢丢的NaCl去掉，去掉之后的总离子浓度为0.281 mol/L，与生理盐水和0.01 mol/L PBS的相差不大，甚至说是无显著性差异，说的更准确点就是对于死细胞来说，影响并不大。
如果要是不加NaCl的话，配成的溶液就是PB溶液，就不在这里多讲了，所以我最终选定的是保持渗透压稳定的PB来配置固定液和脱水剂，那用PB溶液作为溶剂配制蔗糖溶液，这样脱水的话，可以保证PH维持在7.2-7.4之间，同时又可以避免在冰冻的过程中盐类造成的额外的损伤。
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