分子克隆概述
分子克隆用于组装* DNA 分子并指导其在宿主生物体内的复制,形成多个 DNA 分子。克隆是指复制一个分子以产生具有相同 DNA 分子的细胞群。这种方法常用于扩增含有全基因或任何 DNA 序列(如启动子、非编码序列和随机片段化 DNA)的 DNA 片段。分子克隆是将目的基因 (GOI) 插入到质粒载体中的过程,然后将该载体插入到表达 GOI 编码的蛋白质的细胞中。一旦蛋白质在细胞中得到表达,这种表达即可用于各种不同的研究(如细胞信号传导、形态学或其他方面)。
克隆不仅是制造一个基因或其他细胞成分的拷贝,而且是改变 DNA 序列中的一个基因,然后复制它。为了扩增活生物体中的任何 DNA 序列,该序列必须与复制起点相连,并且能够指导自身和任何相连序列的繁殖(例如:可被用于克隆)。如果对内容感兴趣可以到默克www.sigmaaldrich.cn看具体内容。
分子克隆的重要性/应用
分子克隆可用于以下领域:
用于探索蛋白质及其功能。利用* DNA,研究科学家可以指导复制(生产*蛋白),并通过克隆操纵细胞,从而了解更多关于特定蛋白的知识,并将这些知识应用到疾病和病原体等更大规模的研究工作中。1
它有助于探索许多不同物种(包括人类和其他动物)的基因组序列,并创造转基因生物,如除草剂抗性植物等。
用于细胞周期、基因组组织、基因表达和基因治疗。它也可用于发现新药和合成新的*疫苗。
由于其简单性、高成本效益、快速性和可靠性,它成为了临床微生物学中的一个重要工具。该技术的工业应用实现了以抗微生物肽和可用作治疗剂的*细胞因子的形式生产新的抗生素。1
利用该技术开发的基因探针在遗传性疾病的早期诊断、法医调查和常规诊断中发挥了重要作用。1
分子克隆过程
任何 DNA 片段的克隆基本上涉及以下步骤:
选择克隆载体(例如或或以及宿主物种。有关选择载体的指导帮助,请参阅我们的表达载体选择指南
载体DNA的制备(例如:,)
将* DNA 导入或插入宿主生物体:
将 DNA 插入宿主生物体的方式取决于所选择的实验方法(即转化、转导、转染、电穿孔)
含有载体序列的生物体的选择
筛选具有所需 DNA 插入片段和生物学特性的克隆
关于分子克隆的详细文章可以在中找到。
在分子克隆过程中,面临着各种各样的可以检查的问题。以下是几个可能的原因和建议的解决方案: