准备工作
1.仪器设备
CO2 培养箱、双人单面超净台、倒置显微镜、台式冷冻离心机、水浴锅、水浴摇床,医用冰箱、-80°冰箱、移液器(一套)、眼科剪、眼科镊。
2.试剂耗材
小肠类器官培养基,小肠类器官消化液,小肠组织保存液,小肠类器官缓冲液,硫酸庆大霉素,双抗,组织固定液,基质胶,60mm细胞培养皿, 100μm滤筛,15ml离心管,1.5ml EP管若干,4度冰盒,眼科剪刀,眼科镊。
操作流程
1.类器官操作流程之——样本准备
(1)将组织放入含有器官保存液的取样瓶中,4℃从医院/实验室取回。
(2)将取样瓶消毒,组织取出放入培养皿样本拍照,并登记,大小,颜色,软硬程度,组织类型等信息。
2. 类器官操作流程之——清洗-剪碎
添加含有双抗、庆大霉素的类器官缓冲液浸泡,用眼科镊刮去肠道粘膜,肠绒毛等。在培养皿中用类器官缓冲液清洗三次(每次更换培养皿)后剪碎,剪成大约1mm3的组织块。静置2次。
3. 类器官操作流程之——消化-过滤
(1)用组织消化液在37℃进行消化10-15min(消化过程中随时观察消化情况)。
(2)类器官缓冲液终止消化,用枪头轻柔吹打可以看到液体变浑浊。