革兰氏染色法:细菌标本经图片、干燥、固定后，先用结晶紫溶液初染1min，水洗后以碘液媒染1min，水洗后用95%乙醇脱色至紫色不再脱褪，水洗后用稀释苯酚复红或沙黄复染0.5min，水洗，带玻片干燥后镜检。由此可见，影响革兰氏染色的关键步骤是脱色，染色结果的准确性与脱色时间长短有直接关系。
另外涂片太厚、太薄会使菌体分布不均；干燥温度过高会导致菌体变形；染液放置过久也影响染色效果；不同时期细菌标本或培养物，染色后结果也会所差异。
细菌染色时应选用新鲜或培养18-24h的细菌培养物。
革兰氏染色四大基本步骤：结晶紫初染碘液媒染乙醇脱色沙黄复染其中乙醇脱色是关键因为如果脱色过度，有可能会使革兰氏阳性菌呈假阴性如果脱色不够，有可能使革兰氏阴性菌呈假阳性
