细草微风岸，危樯独夜舟。
星垂平野阔，月涌大江流。
名岂文章著，官应老病休。
飘飘何所似，天地一沙鸥。
——杜甫《旅夜书怀》
无意间发现一个很不错的微信公众号《星光拟南芥》，阅读其中的大部分推文后感觉更不错。也正是学习了其中关于烟草瞬时过表达的推文，才初次了解到一种新的报告系统，即RUBY报告系统[1]。
我们常用GFP及其变体如RFP、YFP、mCherry等作为基因表达的报告蛋白——需要荧光显微镜制片观察；此外还有GUS或荧光素酶作为报告酶——需要添加底物。
而RUBY报告系统则与众不同，其作用原理是：将酪氨酸转化为鲜艳的红色甜菜碱，无需使用特殊设备或化学处理，即可用肉眼清楚观察。
甜菜、火龙果中的鲜红色即为甜菜碱积累的结果。由于甜菜碱的生物合成途径较为清楚，且比较关键的是只需要三个酶促反应就能把酪氨酸转化为红色甜菜碱。
酪氨酸（Tyrosine）在苯环上羟基化，生成L-3,4-二羟基苯丙氨酸（L-DOPA），L-DOPA进一步被CYP76AD1氧化为cyclo-DOPA，或者L-DOPA进一步被DODA催化为Betalamic acid，随后cyclo-DOPA与Betalamic acid缩合成甜菜碱。最终，通过葡糖基转移酶将糖部分添加到甜菜碱中，产生鲜红色甜菜碱。
三个甜菜碱生物合成相关的基因构建到一个单一的开放阅读框中，该阅读框可以使用单一的启动子和终止子表达。每个基因之间插入编码2A肽的序列。蛋白在翻译后，2A肽进行自切割，释放出用于甜菜碱生物合成的单个酶。2A肽链接的甜菜碱生物何曾基因的开放阅读框被命名为RUBY。
相关的一系列载体都可以在addgene网站，主要的区别在于融合了不同的启动子。
35S:RUBY
