Figure 1 Development and characterization of maize RUBY haploid inducer.
Figure 4 Development and characterization of tomato RUBY haploid inducer.
既然是可肉眼观察的能够显现红色甜菜碱的报告系统,那我猜想一定可以用来做蛋白互作验证,将合成红色甜菜碱的三个合成相关基因分别构建在两个独立载体中,类似酵母双杂交那样,即可。
果不其然,我能想到了,别人早就想到了,甚至在我想到的时候,别人早就完成了。这大概是我小时候经常用以告诫和时时警示自己的一个逻辑:世界上最快的速度或许不是光速,而是在你还没开始的时候别人早就结束了。
这些都是今年的文章,这一篇也不例外。文章中果然借鉴了酵母互作系统的原理。GAL4-RUBY系统应用而生[8]。利用这一系统即可实时在植物叶片(如烟草)上肉眼观察蛋白-蛋白之间的互作。在植物体内的互作可以使直接互作,也可以是间接互作,总之互作之后致使RUBY报告基因的转录激活,从而在活体植物的叶片组织中产生显著肉眼可见的红色代谢产物——甜菜碱。
AtRAR1和AtSTG1b。VP16-AD作为与拟南芥RAR1蛋白的N端融合蛋白表达,而GAL4-DNA结合结构域作为与拟南芥SGT1b蛋白的C端融合表达。这两种蛋白质与UAS-RUBY基因在N. benthamiana中的共表达导致甜菜碱的产生,与包括GAL/VP16基因的对照相比,甜菜碱的产生约为对照浸润的50%。相反,已知抑制与SGT1b结合的AtRAR1序列中的H217Y取代(在突变体AtRAR1-29中发现)导致甜菜碱积累显著减少。