巨鲵是《生化危机4》中第一个大Boss，它是寄生虫实验失败的产物，全长在20米以上，寄居在湖里的它会吞噬一切湖面上的猎物，在这场战斗里，你必须舍弃枪支，用鱼叉与之搏斗。宏大的战斗场面，电影化的叙事镜头，标志着《生化危机》系列进入了新纪元。
第六名：巨人
巨人与巨鲵类似，也是《生化危机4》中身形巨大的Boss，它的个头有两层楼那么高，不费吹灰之力就能把你压扁，你必须掌握好战斗节奏，既要注意攻击Boss的弱点，也要留意小怪的动向。
第五名：暴君T-103型
暴君T-103型是T-002的改良版，是《生化危机2》的经典Boss，在《生化危机2重制版》中的优秀表现，让暴君在榜单上名列前茅。当里昂和暴君在长廊上相遇之后，它将一直追逐你到天涯海角，逐渐逼近的沉重脚步让你肾上腺素飙升、神经紧绷、冷汗直冒。
第四名：铁娘子
对于许多玩家来说，铁娘子是《生化危机4》的一大亮点，足以让人回忆起该系列的恐怖往昔。
游戏中未见其人，先闻其声——似乎是被冻死一般，她发出令人毛骨悚然的战栗和喘息。当大门打开，她扭动着身子，缓缓挪来。不管玩家打出多少子弹，她就是不会死。所以玩家只能选择逃亡。
接下来，她将在垃圾滑槽场景中与玩家再次相遇：相同的声音、相同的动作，不同的是外貌和攻击方式。此时，她会伸长手臂，将玩家拉入满是长刺的怀中，瞬间击*。
第三名：丽莎·特雷沃
