《蒙娜丽莎》的眼部和嘴部
达芬奇重点描绘凸显蒙娜丽莎面部表情的部位——嘴角和眼角，他有意识让它们模糊，让这两个部分融入柔和的阴影之中，最终让画中人物的表情让人难以琢磨。
据X射线分析，达芬奇使用了一种棕色颜料，笔触极为细腻，反复涂抹多达三十层。蒙娜丽莎的脸颊轮廓和微笑带着柔和的色调，上面蒙着多层颜色，随着光线和观看角度的变化，它们也在不断变化。
哈佛大学医学院的神经科学家玛格丽特·利文斯通认为，“与高空间频率图像相比，低空间频率图像中的笑容更加明显。因此，你在看这幅画的时候，如果让目光落在背景或蒙娜丽莎的手上，你对她嘴部的感知主要基于低空间频率，所以她看起来比你直接盯着她的嘴时显得快乐许多。”
《蒙娜丽莎》的手部
肖像画的最高标准
《蒙娜丽莎》另一个动人之处在于她的坐姿，画中女子三分之三侧坐，目视着画外观众，这样的姿势和表情在此之前的肖像画中实为鲜见，宗教画中更是禁忌。
设想的《蒙娜丽莎》创作姿势
在细节处理上，达芬奇也无不尽其能。蒙娜丽莎的双手被誉为“世界美术史上最美的手”。双手具有轮廓美、体积感、生命力，似乎可以看到血管里流淌的血液。
在贡布里希看来，作品最先引起我们注意的还是它“看起来栩栩如生，足以使人惊叹！”他形容，“她像是在看着我们，而且有她自己的心意，她似乎跟真人一样，在我们面前不断地变化，我们每次在他的面前，她的样子都有一些不同。”——如果面对原作，那简直是神秘而不可思议。
作为达·芬奇最具代表性的肖像画，《蒙娜丽莎》展现了文艺复兴时期神性和人性的光辉。这幅人尽皆知的名画，无论从姿势、色彩、光线、构图……不管从哪方面来说，都堪称教科书一样经典，它为后世树立了肖像画的最高标准。
