二、细胞凋亡(apoptosis)
1. 细胞凋亡（apoptosis）的定义
细胞凋亡指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。
特点：细胞皱缩、体积缩小；部分细胞器、核糖体和核碎片被细胞膜包裹形成 凋亡小体，从细胞表面出芽脱 落，最后被具有吞噬功能的细胞吞噬；磷脂酰丝 氨酸外翻；细胞核染色质浓缩、边缘化、染色质DNA断裂。
2. 细胞凋亡的检测方法
包括：Caspase活性检测；DNA片段化分析和检测；流式细胞术检测；膜变化检测（AnnexinV染色、膜 电位、线粒体功能完整性分析检测实验）及细胞形态学检测。
① Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡
细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用这一特点，被检测细胞悬液 用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞核凋亡细胞。
Annexin V可与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）能够透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配 使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
② 细胞形态学检测-荧光染色法（Hoechst/DAPI）
细胞形态的变化如胞膜皱摺或出泡、核染色质致密、胞质浓缩等，都可作为细胞凋亡的证据。一般以细胞核染色质的形 态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。DNA 特异性染料有：HO 33342（Hoechst 33342），HO 33258（Hoechst 33258），DAPI。三种染料与 DNA 的结合都是非嵌入式的，主要结合在 DNA 的 A-T 碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。
结果评判
Ⅰ 期：细胞核呈波纹状（rippled）或呈折缝样（creased）， 部分染色质出现浓缩状态；
Ⅱa 期：细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；
Ⅱb 期：的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体
③ TUNEL（原位缺口末端标记技术（in situ end labelling technique,ISEL)）
细胞凋亡中，染色体DNA双链/单链断裂二产生大量的粘性3‘-OH末端，在细胞（或组织）结构保持不变的情况下，用荧 光素、地高辛或生物素标记的脱氧尿三磷酸（deoxyuridinetriphate，DUTP)和末端脱氧核苷酸转移酶（TdT)相反应与凋亡细 胞裂解后3‘-OH端结合，经显色反应（细胞染成棕黄色）后检测DNA裂解点的技术。
