节目组选取了人们常喝的3款茶叶：龙井、普洱以及菊花茶。
首先在第一天上午9点钟，分别冲泡了这3种茶叶，并将3杯茶水放置。
之后又在当天晚上9点钟，同样冲泡了3杯茶水并静置。
然后第二天上午9点，又再次冲泡了3杯新的茶水，此时最开始泡的3杯茶已放了24个小时，另外3杯茶水也已过去了12个小时。然后对三组茶水的味道和成分进行检测、比对。
隔夜茶味道检测
先是邀请了品茶专家对前两组隔夜茶水的味道、口感进行了品鉴。结果发现无论是放置了12个小时，还是24小时的茶水，在口感和味道上基本相同，都没变质，和新泡茶口感和味道几乎一样。而普洱，隔夜茶的味道反而更醇。
亚硝酸盐是否超标
之后实验人员将这三组茶水送到北京营养源研究所，进行茶水中亚硝酸盐含量的检测。检验结果显示，
普洱和菊花茶中，无论是新泡的茶、还是搁置了12小时和24小时之后，茶水中亚硝酸盐含量均低于0.2mg/L。而龙井现新泡的茶也也低于0.2mg/L，不过龙井在经过12小时和24小时之后，茶亚硝酸盐含量分别为为0.25mg/L、0.26mg/L，比其他组略高。可见，三组茶的检测结果都远低于1mg/L（国家饮用水卫生标准规定生活饮用水中的亚硝酸盐含量不得高于1mg/L）。
