图3 (A)诺丽果汁抑制血管生成网络的情况。在l00%的生长介质中培养七天,在生长介质中添加10%的诺丽果汁处理来自于三个胎盘的30个外植体;在生长介质中,来自于同一个胎盘的30个可控的外植体用10%的氯化钠处理。所有介质的酸碱度应平衡到7.4。介质每两天更换一次,同时进行计数。两种处理的差异是十分显著的,P
诺丽果汁的剂量效果是通过测试各种诺丽浓度抑制血管生长和血生长的疗效而得出的。图2显示,当在5%和10%的诺丽果汁中添加生长介质时,诺丽对抑制血管生长具有较高的效率,而浓度为2.5%的诺丽果汁则失去抑制血管生长的效果,但是在培养基中添加2.5%的诺丽果汁却可以有效地(P=0.005)降低毛细血管的生长和扩散速率(尽管诺丽含量小于5%和10%),参见图2B。
将胎盘外植体培养一周,然后置于10%的诺丽果汁中或10%的氯化钠HPVAM中,以观察诺丽对抑制血管生长及破坏血管网方面的效果(图3A和3B),10%的氯化钠作为埘照组实验,其不会财血管的生长产生任何抑制作用。利用MTT法进行分析,处理实验组显示为深蓝色,表明诺丽处理过的小孔中细胞发生凋亡。此外,大多数实验结果显示诺丽处理之后血管完全退化,且观察不到血管的生长(见图3A)。而在外植体中,诺丽处理七天之后,血管组织虽然保持存活状态,但其形态大为减小,血管网络的复杂程度也大为降低(图3B)。血管退化是由其细胞凋亡过程中产生的一个类似于球形的小泡导致的(图4和5)。使用TUNEL实验(参照“实验材料与方法”),我们发现用10%的诺丽培养基处理,可以在很大程度上可以诱导细胞凋亡(表1)。
人类乳腺癌外植体置于l0%的诺丽培养基培养两周,与对照实验组相比,诺丽处理组人类乳腺癌外植体的生长率明显下降(图6A)。此外,与对照实验组相比诺丽处理组外植体血管生长的发生率显著降低(P=0.009)(P=0.02,图6B)。
