（3.）基质分离法 又称为寄主分离，是从食用菌着生的原基上，取一段木头，从段木中分离提取菌丝，经纯化培养后，获得菌种。方法是把子实体着生部位去皮截取一块木头，用0.2%的升录液浸过，用无菌水冲洗、擦干，用刀刮去表层，切割火柴杆粗细的一点，放入三角瓶内，经5天培养就看到小木块周围白色的菌丝，待蔓延后，再经纯化转到新的培养基进行培养，即得到纯净的菌种，但必须进行出菇观察试验。
（4）扩大培养 我们用上述3种分离法得到的纯菌经出菇试验观察，可按生产规模及栽培研究的需要，扩大对菌种的繁殖。
5.原种的制备：
将分离得到的母种，放入木屑培养基中进行扩大培养即成原种。木屑培养基成份：阔叶木屑75%，细米糠（或麦获）22%，糖1.5%，石膏粉1.5%。加入适量清水，除松、杉、柏、樟等树木的木屑含有对香菇菌丝生长有害的树脂、树脂酸、精油等物质不能直接利用外，其它阔叶树木的木屑一.般均可使用。目前多用棉子壳、甘蔗渣、麦秆草等代替木屑使用的。
制法：木屑、麦麸、石膏粉按上述比例拌匀；然后加入已溶有糖的水，搅拌均匀，使培养基含水量达到60--65%。搅拌好后即可装瓶，培养料装入瓶中边用力振动瓶子，同时用扁形铁钩将培养料表面压平，料至瓶肩，用水洗去瓶内外之未屑，并用一圆木棒将瓶内培养料打一洞至瓶底。然后瓶口塞好棉塞并包上牛皮纸及时进行高压灭菌。一般在17磅压力灭菌1小时。在没有高压灭菌锅时，也可用木慨子连续蒸7~ 8小时也可达到灭菌目的。
灭过菌的瓶子或培养料，待冷却后放入接种室（箱）内，在无菌操作的条件下将斜料面上长好的母种接人木屑培养料，约接1厘米的种量为宜，接好种置于20--25℃下培养。生长正常的情况下约一个月左右菌丝就可长到瓶底部或长满整个培养料块。将长满菌丝的木屑培养基移至阴凉通风处放置，这就是食用菌的原种。一般在低温下可保存4--6个月。在生产上需要原种量较大，一般可用原种再接到木屑培养料上进行扩大原种生产，一瓶原种可扩大接种到70--100瓶，由原种扩大生产的菌种为栽培种。
