图3 转基因CENH3点突变体的转化和杂交示意图(Kuppu et al., 2015)。
图4 转基因两步法与非转基因一步法单倍体诱导系的示意图(Kuppu et al., 2015)。左侧表示转基因两步法，CENH3敲除可由CRISPR/Cas9生成或从EMS诱变群体中挑选，并用修饰过的CENH3互补。右侧为非转基因一步法，功能点突变体可通过TILLING或从自然变异中挑选出来，并直接用作单倍体诱导系。中间显示了每种方法的预估生成时间。
研究进展三
2020年2月24日，Britt教授团队在Plant Biotechnology Journal杂志上发表了题为“A variety of changes, including CRISPR/Cas9 mediated deletions, in CENH3 lead to haploid induction on outcrossing”的研究论文。该研究从拟南芥EMS诱变后代中鉴定了另外31个单个氨基酸替换的CENH3等位基因，将其导入cenh3敲除突变体，可以补偿内源CENH3的敲除效应，转基因植株接受野生型花粉后能够诱导单倍体的产生。并且，利用CRISPR/Cas9编辑技术获得了保守的CENH3组蛋白折叠结构域中αN螺旋的移码突变类型，该类型为优良的单倍体诱导系，用野生型花粉授粉时诱导系生长和发育正常。这些发现为作物育种者培育单倍体诱导系，提供了更多的选择。
图5 拟南芥具有突变位点的CENH3结构预测(Kuppu et al., 2020)。（a）AtCENH3预测的结构与核小体3av1（一种携带组蛋白3.2的人类核小体）(Tachiwana et al., 2011)对齐。（b）AtCENH3带有指示突变位置的侧链：蓝色=单倍体诱导物，红色=非诱导物，绿色=致死。（c）alphaN螺旋（TVALKEIRHFQK）和N端尾区（SQKKSYRYRPG）的紧邻11个氨基酸的静电荷显示为空间填充模型。蓝色表示带正电，红色表示带负电。
研究进展四
2021年11月19日，Luca Comai教授团队在Science Advances杂志上发表了题为“Epigenetically mismatched parental centromeres trigger genome elimination in hybrids”的研究论文。该团队在论文中提出了一个CENH3介导的单倍体诱导模型（图6）：在成熟的母细胞中，CENH3变体会被选择性地从染色质中去除，但野生型中的CENH3不受影响；杂交后，CENH3弱化的母本着丝粒会与父本野生型着丝粒竞争加载CENH3；由于协同结合效应，CENH3会优先加载在野生型亲本的着丝粒上；在随后的有丝分裂过程中，单倍体诱导系的染色体由于其弱着丝粒而不能正常分离；其中，VIM1介导的泛素化或甲基化可以影响CENH3的稳定性，并且VIM1有利于CENH3的加载。
