梯度洗脱中洗脱剂包括甲醇和水，对于不同梯度，甲醇和水的比例也会有所不同，第一梯度洗脱、第二梯度洗脱、第三梯度洗脱、第四梯度洗脱梯度洗脱所用洗脱剂中甲醇的体积浓度依次增加10~20%。
比例组成具体为：第一梯度洗脱用洗脱剂中甲醇和水的体积比为10:90；第二梯度为20:80；第三梯度为30:70；第四梯度为40:60。
所述第一梯度洗脱、第二梯度洗脱、第三梯度洗脱和第四梯度洗脱的洗脱时间独立地为0~50min。所述四个梯度的洗脱时间具体为：第一梯度洗脱的时间为0~15min；第二梯度为15~35min；第三梯度为35~45min；第四梯度为45~50min。
所述四个梯度中洗脱剂的流速独立地为0.8~1.2mL/min；按照此条件，使用ChromQuest软件（ThermoQuestItaliaS.p.A.）进行对数据采集和分析处理，可得到待测样品的HPLC图。用于对梨果实不同发育时期5-羟基松柏醛、5-羟基松柏醇定性和定量分析。
根据标准品与样品溶液的色谱峰的保留时间可确定样品中是否含有目标代谢产物，即可对梨果实发育目标代谢物进行定性。
采用HPLC检测得到待测样品中目标检测物的高效液相色谱图，能够同时得到5-羟基松柏醛/醇的吸收峰面积，通过对应吸收峰面积分别代入标准曲线中，即可得到待测样品中目标检测物的浓度。
对于不同梨果实的发育时期的5-羟基松柏醛和5-羟基松柏醇的浓度每次做三组生物学重复，取相对应的平均值含量绘制5-羟基松柏醛和5-羟基松柏醇的柱状图，可明显看出不同梨果实发育时期中5-羟基松柏醛和5-羟基松柏醇的变化趋势。
HydA和5-HydAlc化学合成条件分析在木质素代谢途径中，5-羟基松柏醛和5-羟基松柏醇代谢流向尚不明确。主要通过化学合成的方法，得到5-羟基松柏醛/醇进行生物学研究。
