坂田银时
坂田银时为本作的主角，有着银色的天然卷发和死鱼般的眼睛、毫无上进心，时常玩小弹珠、彻夜饮酒，喜欢吃甜食尤其最爱圣代，吃白饭时会搭配红豆一起食用，与新八、神乐一起经营着一家什么都做的「万事屋」。幕末时曾活跃于攘夷活动，因为超强实力加上银白色的头发，被称为战场上的传说人物「白夜叉」。有着一流的剑术，却因废刀令而无法使用真刀，现在使用的爱刀「洞爷湖」是在电视购物买的木刀。
志村新八
志村新八为万事屋的一员，继承了亡父留下为剑道道场「恒道馆」，为了复兴道场，边打工边学习武士道，某次在打工时被银时解救而成为伙伴。新八的个性温柔有礼貌，是个标准好青年，因为戴着眼镜，又被戏称眼镜才是本体，平时虽然存在感很低，不过在剧中扮演重要的吐槽角色。有一名18岁在歌舞伎町陪酒的姊姊志村妙，除此之外还是偶像寺门通的忠实粉丝，为寺门亲卫队队长。
神乐
神乐同为万事屋的一员，是被称作宇宙最强民族「夜兔」的天人，力大无穷、攻击力非常高，时常绑着两个球状发型，身穿类似中国的传统服饰，讲话时常在后方加上「～aru（アル）」，由来为模仿中国人讲日文时的方式，因为身为夜兔，所以不能长时间曝晒阳光，外出时总是带着一把紫伞，但其实也是用来攻击的武器，食欲旺盛，最喜欢的食物为醋昆布。
定春
定春外表为巨大的狗，但真实身份为宇宙生物「狛神」，被经济困难的巫女遗弃在万事屋门前，神乐将其收养为宠物，名字是由神乐所取，并经常被神乐当作代步工具，喜欢咬人的头，食量非常大。
攘夷四天王：桂小太郎、高杉晋助、坂本辰马（外加主角坂田银时）
攘夷四天王为幕府末期最为活跃的四位攘夷志士：坂田银时、桂小太郎、高杉晋助、坂本辰马的代称，因为「攘夷」的日文发音「Jo-i」和英文「JOY」相同，亦又被称作「JOY4」。他们为了对抗天人的入侵而集结，幕末时和天人发生多次战役，但攘夷战争失败后，天人完全控制幕府，被幕府当成「恐怖份子」，下令追*成为「通缉犯」。
