土方十四郎
土方十四郎为真选组的副长，因为对下属的管教严厉又有「鬼之副长」之称，剑术精湛又重义气，总是烟不离口，最喜欢的食物为美乃滋，不论是面食、白饭、饮料全部都要加美乃滋才食用，虽然外表冷酷又帅气，却因身为重度的美乃滋中毒者，让女生不敢接近，和主角银时有着非同寻常的默契与相似处，虽然视对方为死对头，但偶尔也会并肩合作打击敌人。原型为新选组的副长「土方岁三」。
冲田总悟
冲田总悟为真选组一番队队长，剑术在组内首屈一指，也常使用大炮等机械，外表清秀俊美，但个性恶劣、腹黑、冷血无情，又是超级抖S，战力高超却爱偷懒，时常戴着红色眼罩偷睡觉或听音乐，和土方看似感情很好，其实一开始想要篡土方副长的位子，不只时常试图偷袭土方，也常对土方恶作剧，但遇险时两人仍会并肩作战。原型为新选组一番队组长「冲田总司」。
山崎退
山崎退为真选组监察员，土方的直属密探，兴趣是打羽毛球、卡巴迪，经常偷打羽毛球怠忽职守，被土方斥骂。外表一般，存在感很低，却拥有惊人的观察力，很容易融入环境中，喜欢吃红豆面包，有时候还会打扮成《网球王子》的模样打羽毛球。原型为新选组的监察员「山崎烝」。
其他关键角色：长谷川泰三、志村妙、登势、猿飞菖蒲、柳生九兵卫、德川茂茂、吉田松阳
长谷川泰三
长谷川泰三在故事开头为入国管理局局长，负责管理天人出入境的相关事务，后来因为搞砸事情，失去工作被幕府下令切腹，畏罪潜逃后，妻子也离家出走，开始悲惨的无业流浪生活，被神乐称为「简直是没用的大叔」（まるでダメなおっさん），简称废物叔（マダオ）。虽看似一无是处，却是有责任感的烂好人，因时常戴着墨镜，被戏称墨镜才是本体。外表酷似《新世纪福音战士》的碇源堂，加上声优又同为立木文彦，剧中常会出现模仿碇源堂的片段。
