引物作为分子生物学和遗传学领域中最基本的工具之一，它们在许多应用中都发挥着重要的作用，包括PCR、实时荧光PCR、基因突变分析、克隆和基因表达以及DNA测序等。
作为引物合成的关键原料，DNA亚磷酰胺单体，其质量的可靠性和杂质水平对引物的质量和后续的生物试验起到至关重要的作用。
引物合成的文献方法有不同路径，目前主流的合成方法为固相亚磷酰胺三酯法，经过数十年的行业发展，商业化的合成仪可以完成从微克到公斤级的寡核苷酸包括引物的合成制备。然而在固相亚磷酰胺三酯法中，依然会出现基因突变（杂质寡核苷酸），除了关注反应过程中使用的溶剂、催化剂、辅料等，核心的关注点之一在于DNA亚磷酰胺单体的纯度、水分、杂质等因素。
笔者获悉，浙江恒康药业股份有限公司NNaA平台，得益于近20年的小分子化合物合成、纯化、杂质研究、药品法规的经验积累，持续稳定地提供高品质DNA亚磷酰胺单体，为全球引物合成、基因合成企业保驾护航。
DNA亚磷酰胺单体的杂质浅析
我们将亚磷酰胺单体结构分为上图6个基团，其中DNA亚磷酰胺单体紫色X为空。红色戊糖环通常不会对产品质量产生影响。
1. 绿色膦保护基团，在DNA亚磷酰胺单体的合成过程中，因为膦试剂作为起始原料之一，其质量问题，从而导致P的保护不到位，或是有其他膦基团（杂质），在引物合成中，导致5’-3’不能反应或是产生其他反应，导致引物合成中产生突变。
2. 蓝色DMTrO基团，在DNA亚磷酰胺单体的合成过程中，反应反应条件控制和工艺本身的问题，其保护率不高，5’仍有数部分OH未保护，导致在后期引物合成中发生副反应，进一步导致引物合成中产生突变。
3. 黄色碱基，碱基的杂质可能存在风险是核苷原料自带非目标碱基，例如dA中含有dC，导致dA的DNA亚磷酰胺单体含有dC的DNA亚磷酰胺单体，导致产生突变。
4. 深绿色碱基保护基团，因为工艺和原料的问题，导致保护基完全保护，导致在后续的反应中产生更多其他单体杂质，进而导致引物合成中生产突变。
据业内同行介绍，浙江恒康药业的NNaA平台，源自医药千吨级产能原料药符合ICH规范的GMP管理体系和近20年小分子原料药研发经验，严格管控原料筛选、质量控制、杂质控制、工艺操作、生产管理、分析放行等等，并且根据客户需求不断优化生产水平，用心生产和提供高纯度、微水分、低杂质的亚磷酰胺单体。
