图二
新界面下拉,出现图三左,点击“CDS”出现图三右,复制途中棕色区域序列,即为我们目的基因的CDS序列。当然,如果没有同源蛋白的问题,你可以直接复制所有序列进行分析。
图三
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设计引物序列
打开Origin7,点击“File”下拉菜单里的“New Sequence”,将序列粘贴在窗口里如图四,点击“√”就可以进入分析界面。
图四
新界面里点击“Search”,点击“for Primers & Probes”如图五左上,然后界面弹出图五右上,点击“Parameters”和“Ranges”,根据反应条件设置参数,一定要修改引物长度,防止引物过短,我习惯修改为图四下,然后点击“Search”就可以自动得到结果。
图五
Oligo7自动给出了可能的引物对,只需要点击右侧框内“Score”,引物按软件认为的优劣进行排序,你可以看到引物的关键信息,比如长度,Ta值,GC含量。我这里参数设置少所以图六内结果多,一般限定多个参数后,软件只给出几对引物。