图十
④错误引发位点：点击“False Priming Sites”即可以分析。个人感觉实践中意义不大，因为往往正确概率很高如图十右，错误概率即使达到130问题也不大，所以大家这里自己抉择吧。
⑤PCR总览：如果你的引物有太明显的问题，在这个界面的“Comments”下方白框里会出现如图十一右的红字提示，那么你就需要根据提示修改或者更换引物。如果没有，则会和图十一左“Comments”内为空白，你只需要根据这里提供的Tm值，然后减5，就是你设计的这条引物的退火温度。
图十一
⑥内稳定性：上述分析完后，点“Internal stability”这个选项，最好弹出来的曲线图像如图十二：中间高两边低的弧形，这样的引物稳定性高，成功概率更高，其实实践中如果做不到问题也不是很大。
图十二
Oligo7设计引物经验就这里为止了，如果你觉得过程太繁琐，也可以选择评价并修改他人设计好的引物，这个方法以后有机会再讲啦！
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