前言
基于模块构建的质粒是一种利用模块化设计原则来构建质粒的方法,质粒的构建被分解为多个独立的模块,每个模块负责执行特定的功能或承载特定的序列,通过重新组合这些模块,可以快速而灵活地构建具有不同功能或特性的质粒。
我们研究发现,通过将整合模块按照设计要求组装在一起,可以构建具有染色体整合功能的质粒,在转化裂殖酵母细胞时,这些质粒会导入细胞内,并通过*事件整合到目标位点上,实现对目标基因的整合和表达。
启动子(ab)模块我们选择了七种在裂变酵母研究中常用的启动子来进行研究,它们分别是:Pnmt1、Pnmt2、Pnmt41、Padh2、Padh81、Padh3和Purg1。
其中,包括了一系列nmt启动子,即Pnmt4、Pnmt41和Pnmt5,这些启动子被广泛应用于控制外部基因的表达,可以视为人工启动子,这些基因的来源是内源性nmt81基因的启动子。
相比于Pnmt7,Pnmt1的启动子活性较弱,甚至更弱,可以通过在培养基中添加或去除硫胺素来控制这些启动子的转录水平。
在硫胺素存在的情况下,表达被抑制,而在硫胺素不存在的情况下,表达则被诱导,Pnmt81通常被用于过表达下游基因,比如pREP1质粒中的基因。
一系列adh1启动子变体包括Padh1、Padh41和Padh81。其中,Padh1是从内源性adh1基因的启动子区域获得的,而Padh41和Padh81则是Padh1的突变版本,它们的启动子活性较弱。
还有一种名为Purg1的urg1启动子,它是一种诱导启动子,能够对尿嘧啶作出反应并被激活。