FPtag-N（bc）模块
用于N端子标记的第二个模块应该是FPtag（bc）模块，该模块包含一个荧光蛋白基因，后跟接头序列，其两侧分别位于5'端和3'端。
作为对照，可能需要构建另一种菌株，该菌株表达没有GOI的FPtag，可以使用属于组VIIa的模块，用于N末端FLAG/HA表位标记的模块，也可以通过PCR制备。
这些模块包含带有FLAG或HA表位序列的寡核苷酸引物，这些小表位标签也可以通过寡核苷酸退火方法制备，与组IIIa中的模块类似，组VIIa中的每个模块都包含一个FPtag，两侧具有内聚末端“b”和“d”。
我们强烈建议将每个模块元素（包括线性模块如GOI）稀释到每20 fmol/μl的浓度中（13.3 μl-11 kb的DNA；请注意，载体pBMod长度为3.5 kb）。
浓度对于有效连接似乎非常重要，取每个模块的1 μl（20 fmol）并在PCR管中混合，使用去离子水（ddH2O）填充管子，使总体积达到16 μl。
将2μl 10× 缓冲液加入，用于连接酶，加入0.5μl T4 DNA连接酶和1.5μl BsaI，总体积为20μl，该管可以放置在热循环仪上，以自动执行所有反应步骤。
金门反应基本上包括两个主要的重复步骤，然后是终止反应，第一步是通过BsaI进行DNA消化（37°C，2分钟），第二步是连接（16°C，5分钟）。总共重复这些步骤最多50次。
升至50°C，持续10分钟，随后进行热灭活步骤（80°C，10分钟），样品可以保持在4-15°C之间。
