基础知识背景 — 什么是原生质体？
非哺乳动物细胞，包括细菌、真菌和植物细胞，都有一个细胞壁结构来维持细胞的形状。细胞壁位于细胞膜外面，特别坚固，其特别的组成成分含有聚合物，包围细胞内部脆弱的细胞质，支撑和保护细胞。在细菌中，细胞壁包括几层肽聚糖，真菌细胞壁含有几丁质，几丁质是昆虫壳中的化合物组分，植物原生质体则被果胶和纤维素包围。
虽然这些刚性层为保持细胞形状提供了重要的功能，但它们在细胞裂解过程中容易产生问题。为了释放细胞内容物进行生化实验，需要打破细胞壁，这是一项艰巨的任务。这也为遗传相关实验带来了问题，因为细胞壁是遗传物质转移的机械屏障。
为了避免这些问题，可以部分移除细胞壁，制造所谓的“裸”细胞，这些细胞仅仅被细胞膜或原生质体所包围。原生质体不受完整细胞壁的限制，呈球形，称原生质球。
应用类型 — 获得原生质体有什么重要作用？
常用方法原生质体广泛用于DNA转化，因为细胞壁会阻止DNA进入细胞。除了在DNA和蛋白质转染中使用外，原生质体还用于再生整个植物，原生质体融合制备杂交体，膜片钳实验等。原生质体可用于研究生物膜，包括高分子和病毒的摄取。也用于体细胞的变异克隆。使用原生质体融合技术可让原生质体也用于植物育种。此外，在某些细胞中表达荧光蛋白的植物的原生质体可用于荧光活化细胞分选（FACS），方便保留特定波长发荧光的细胞。
常用方法
去掉植物细胞壁的方法可以是机械的人工操作，也可以利用酶解法。较早利用机械法制备原生质体，如将组织切片置于低渗状态从而细胞壁收缩(质壁分离)，这种方法产量低，现在很少使用。
酶法更可控、简单，但需要优化，具体的酶取决于具体的细胞类型:
植物细胞使用纤维素酶、果胶酶和木聚糖酶的混合物;
对于较低等的植物细胞，如海藻，酶的使用将取决于细胞壁组成；
真菌细胞从酵母开始，使用几丁质酶；
细菌细胞使用溶菌酶 EDTA。
注意事项 - Tips
1.确保具备足够的初始材料，可以使用相同的试剂多次尝试，因为可能需要调整条件。这对于利用酶法制备原生质球尤为重要。
2.为了得到活的原生质体，起始物质应该处于生命的全盛时期。所以选择从幼嫩的植物组织开始，或者在生长的对数阶段积极地进行细胞培养。非常年轻的组织通常很小，他们更容易受到伤害，这增加了他们在处理中可能无法存活的几率。另一方面，老的组织不容易再生，更容易感染。
3.在进行任何处理前将细胞冷却并保持是很重要的，保持细胞低温可以减缓坏死。但保持细胞温度高于冰点也是至关重要的，因为即使是在介质中短暂形成的冰晶也会损害细胞，减少产量。
4.原生质球对机械压力和渗透压非常敏感。为了防止它们破裂，需要维持等渗条件，这意味着细胞内外的渗透压应该相等，渗透压取决于盐离子的浓度，不平等的压力会导致细胞破裂(低渗溶液)或内爆(高渗溶液)。
5.即使是细胞的年龄和酶的批次之间的细微差别，也会形成不完全的细胞壁消化和过度消化之间的对比，前者原生质球产量为50%，后者导致大量死亡细胞。在大多数实验中，不需要完全移除细胞壁——部分移除细胞壁的原生质球就可以了。
