耶稣与门徒们共进的最后一次晚餐，所以这幅画也被命名为《最后的晚餐》。在晚餐过程中，耶稣拿起面包向门徒示意，说这是我的肉体，然后举起酒杯说这是我的血，为赎罪而流出的宝血。门徒们听后都默默接受，神色各有不同。
达芬奇绘制这幅作品历时五年之久，过程异常艰辛。
在创作过程中，他反复揣摩人物的心理状态，仔细研究人的表情和动作，连手部的细节都描绘得无比精致，最终将场景中的震惊、悲伤、愤怒等复杂情绪都生动地表现了出来。
构图也非常出色，达芬奇打破了先前绘画家将叛徒犹大单独绘出的传统布局方式，而是将耶稣和十二个门徒并排坐在一起，面向观众，耶稣坐在中心位置。
这种布局增强了画面的透视感和整体美感，观赏这幅名作，首先看到的就是它异乎寻常的构图，给人一种强烈的视觉冲击。
