从这张图还可以看出,实际应用的质粒是很复杂的
总之,现代生物工程中会采用各种办法把负载有目的基因的质粒导入宿主。
- 诱导表达
转基因三个字完成了,接下来就是让宿主乖乖把目的基因表达出来,生产足够多的蛋白。这个过程经常也会被人为控制,比如故意让细胞在增殖到一定数量后再开启合成蛋白。
原因是,基因的表达和蛋白的合成往往需要耗费大量能量,而细胞产生下一代也需要。所以,可以让这堆细胞先繁殖繁殖,等攒得差不多了,一次性产够多蛋白。
结合到operator上的阻遏物
具体的操作是在质粒上加一段操纵基因(operator)和阻遏物基因(repressor)。
平时,阻遏物基因会产生阻遏物结合操纵基因(上图中operator和repressor在RNA聚合酶前结合堵路),让转录时的RNA聚合酶被喊停,RNA转录不出来,蛋白也没法合成。
加入特殊的试剂后,这些试剂会结合阻遏物,防止阻遏物结合操纵子,从而实现DNA的转录和蛋白的合成。
- 纯化和检测
等这些宿主细胞把蛋白产够了,它们的日子基本就到头了。如果宿主运气好,生产的蛋白是分泌到细胞外的,那么就直接在培养基中提纯,之后把它们保存起来,找机会继续“压榨”。
如果不幸,宿主细胞产的蛋白不分泌到培养基,而是留在细胞里,我们只能心痛地(实际根本没有)用细胞破碎仪让它们粉身碎骨,让细胞质内的蛋白出来,然后再提纯。
要么把蛋白乖乖上交,要么把蛋白乖乖上缴,还能给你跑了?
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