然后，在真空之前，在溶液中加入0.0075%的Silwet L-77。真空浸润3天后，在小隔间中扫描并计数嫩叶中GFP阳性细胞，以评估转化效率。
在MS溶液中转化的叶片每隔室有14.6±1.2个GFP阳性细胞。然而，在氯化镁溶液中转化的细胞较少。因此，我们决定使用MS介质来进一步估计瞬态变换。
其次，研究了表面活性剂Silwet L-77浓度对瞬态转化效率的影响。表面活性剂的存在可以使细菌溶液渗透到叶腔中，提高瞬时转化效率，但过量的表面活性剂会加速拟南芥叶细胞的坏死。
正如预期的那样，在缺乏Silwet L-77的培养基中转化后，很少有细胞显示出GFP荧光，因为溶液对叶片的渗透受到限制。Silwet L-77浓度与转化效率呈正相关，当Silwet L-77浓度为0.015%时，转化细胞数最高。
然而，在含有0.03% Silwet L-77的培养基中，叶片细胞表现出微弱和较少的转化。
在与农杆菌共培养的拟南芥瞬时转化中，有报道称转化效率与浓度也存在类似的正相关关系，且在农杆菌溶液浓度为0.005%时，转化效率达到峰值。
白杨扦插的表面活性剂浓度是拟南芥的3倍；这种差异可能是由于不同物种之间的叶片结构和年龄不同。此外，转换过程也各不相同。我们将农杆菌溶液的浓度固定在0.015%。
-＜亚细胞定位＞-
瞬时转化试验的主要应用之一是观察细胞中蛋白质的亚细胞定位模式。一些研究已经应用瞬时转化技术来监测杨树蛋白在异源植物系统中的亚细胞定位。
然而，同源杨树的定位研究很少，因此，我们利用农杆菌介导的真空浸润研究了同源植物系统中杨树蛋白的亚细胞定位。
此次检测了四个杨树基因——肉桂酸4羟化酶、GT47C、MTP1和PrxQ的细胞内定位，这些基因之前在异源植物表达系统中被描述。
利用农杆菌介导的真空浸润将c端GFP标记蛋白的表达载体瞬时转化为杂交杨树插枝。
PttMTP1蛋白是一种液泡锌转运蛋白，定位于液泡膜的环状结构。瞬时转化方案的结果在亚细胞定位方面显示了可靠性，选择用于测试靶向不同细胞区室的蛋白质。
-＜基因检测＞-
我们在瞬态LUC报告基因试验中定位了杨树下LHY2基因的启动子，该基因是植物生物钟系统的关键因子。
通过农杆菌介导的真空浸润，将PttLHY2启动子:luc转化为杂交白杨幼苗。在光照、暗循环下每隔1小时检测LUC活动，持续2天。
在茎尖和幼叶中，LUC表达较强。在叶片中，折叠幼叶中的LUC活性高于展开叶和展开叶。
反映PttLHY2基因表达的生物发光表现出昼夜节律，节律高峰出现在黎明后1-2小时。转化后的白杨顶端的典型昼夜表达持续了两天，尽管第二天的发光水平有所降低。
杨树LHY2基因的昼夜节律在以往的研究中也有报道；这些研究使用real - time PCR技术检测了表达水平。与Real-time PCR测定的昼夜节律相比，瞬态LUC检测可以监测到更多的LHY2表达的急性高峰。
