SPR在单周期动力学实验中测试了这些OmCI突变体，目的是确定一小组突变体，以作为纯化试剂的候选。单周期动力学实验在传感器芯片上依次注入逐渐增加的分析物浓度来进行，不需要任何再生步骤来去除前一次注射的结合分析物。
传感器图谱可以使用单位结合位点模型进行拟合，在异质配体模型中包含额外的参数可以更好地解释。在使用单位结合位点模型时，当拟合速率常数时，相对较低的标准误差（S.E.）<0.2%。从视觉上看，该模型似乎在估计结合速率（kon）时表现不佳，低浓度下过高估计kon，在高浓度下低估。
选择根据解离速率（koff）的变化对突变进行排名，这对于亲和纯化至关重要。两个突变体，E141A和M134G，对OmCI-C5复合物的稳定性产生了显著影响。E141A突变将复合物的koff值增加了约29倍，M134G突变则增加了约229倍。
M134G突变体与固定化材料的结合较弱，这暗示蛋白质可能表达活性较低，或者胺耦合到传感器芯片上部分失活。其他突变对koff仅有轻微影响。对照突变F36W位于与C5的界面远处，其koff值略微增加，显示出与WT OmCI相同的结合比例。
传感器图谱表明OmCI-C5相互作用是复杂的，选择在后续的多周期动力学实验中进一步研究。
基于组合的OmCI突变设计适用于C5纯化试剂配体为了进一步降低亲和力，对突变进行了组合模拟。同样，MOE来模拟结合能的变化。由于可能存在协同作用，保留了在第二轮设计中显示出较小影响的突变，根据MOE分析的结果进行了最终选择。
正如预测的那样，组合突变进一步缩短了与C5的结合，有些情况下甚至完全废除了结合。将H164A或R47A突变与E141A突变组合，产生的OmCI变体的koff值比WT OmCI快197-973倍，这些特性有利于将其应用为亲和纯化试剂，保持与C5的快速结合，解离明显增加。
最大的效果出现在E141A/R47A/H164A/L140G四重突变体中，产生了方波传感器图谱，更具有低分子量化学片段的快速结合动力学特性，不是蛋白质-蛋白质相互作用。该蛋白质的koff值约比WT OmCI高5,500倍。M134G突变与E141A和R47A组合使用时完全阻止了结合。
为了寻找二级结构的明显变化，使用了圆二色谱（CD）。E141A/R47A和E141A/H164A双突变体，以及它们的单一突变体：E141A、R47A和H164A。M134G突变体显著增加了koff值，明显降低了结合能力，也进行了测试。
CD图谱与WT OmCI非常相似，除了M134G，它在217 nm处显示出明显的结构丧失，与随机卷曲的增加一致。190 nm处的正峰也消失了，表明整体二级结构丧失。
差示扫描量热法（DSC）评估了突变体的热稳定性，它们在变性后的重新折叠能力，以及它们在与C5形成复合物时的稳定能力。C5显示双相展开；主峰在60°C处展开，显示出69°C处的肩膀，较小、更稳定的结构域或构象体在77°C处展开。
与OmCI形成复合物后，主峰的稳定性显著提高，ΔTm为 8.6°C。突变体还增加了主峰的热稳定性，稳定程度与它们的亲和力减弱一致。
