制备竹荪母种的操作应严格无菌，本文为您详细介绍孢子分离法、菌丝体分离法、子实体组织分离法的竹荪制种教程。
竹荪制种斜面培养基的配制
PDA培养基：
去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂18~20克，水1000毫升，pH5~6y蛋白胨、葡萄糖、琼脂培养基:蛋白胨10克，葡萄糖20克，琼脂18~20克，水1000毫升，pH5~6；综合马铃薯培养基，去皮马铃薯200克，琼脂20克，硫酸镁1.5克，葡葛糖20克，磷酸二氢钾3克，维生素B1，1毫升，水1000毫升，pH5~6。
竹荪菌种制作
配制PDA培养基及综合马铃薯培养基时，先将马铃薯去皮去芽眼，切成小薄片，称取200克，加水1000亳升，置于洁净铝锅中烧煮。至薯块熟透，然后用事先准备好的6~8层纱布过滤，过滤液加水至1000毫升，再加入其他组分，烧煮并不断搅拌，使琼脂溶化，最后调节PH到5~6。配制蛋白胨、葡萄糖、琼脂培养基时，可将各种成分配好后直接烧煮，并测定调节至PH符合要求。
将配好的培养基，分装试管，装入量为试管的1/4。装入后塞上棉塞，每10~20支扎为一捆，用油纸包好管口棉塞，然后灭菌。一般宜用高压灭菌法，在压力1.1公斤/平方厘米、温度121.5C下保持30分钟。然后切断火源或电源，慢慢放气，或让压力自行下降至零，打开排气阀，揭开锅盖，数分钟后，趁热将试管斜放使培养基形成斜面。斜放时，斜面为试管长度的1/3，冷却后即成。每批经灭蕾的斜面培养基，宜抽取3~5支，在25~30公的恒温箱中培养3天，若斜面没有杂菌发生，说明灭菌彻底，可用于接种。
竹荪母种
斜面竹荪母种的制作方法
孢子分离法：
取健壮、无病虫害、无伤口的大形菌蛋，趁其即将裂口之际拣出，用清水洗净表面杂物，在接种室(箱)中用0.2%升汞液漫洗3~5分钟，再用无菌水漂统数次。然后装在事先经消毒的弹簧圈上，一起装入培养器或玻璃杯内，置于大型培养器中，上盖钟形玻璃罩，再一起放入20~25摄氏度的培养箱中培养。当钟罩内的菌蛋破蕾成熟，孢子胶体自溶为液滴时，搬入接种室(箱)，将孢子液用无菌水稀释，注入斜面试管培养基上，放在20~25摄氏度下培养，经纯化转管，即得纯竹荪母种。用此法制作的竹荪母种，孢子萌发率较低，萌发慢，菌丝长满管的时间长。
菌丝体分离法：
取两端有节、表面布满竹荪菌丝的地下竹根数节，洗净后带入接种室(箱)，用0.2%的升汞液消毒，然后用无菌水洗涤数次，吸干表面水分。用无菌接种刀削去外壳，从内壁削出带有菌丝的薄片，切成0.5厘米见方的块，接入斜面试管培养基上，在15~25C下培养，纯化转管即得竹荪母种。
子实体组织分离法:
选取健壮、无病虫害、无伤口尚未破口的大型菌蛋，用清水洗净表面杂物，在接种室(箱)内用0.2%升汞水浸洗3~5分钟，再用无菌水冲洗数次，然后放入置于搪瓷盘内的培养皿中。所有器皿必须事先消毒，整个操作均应在无菌条件下进行。再用无菌接种刀把菌蛋切成1*1.5厘米的小块，然后用无菌接种针接入斜面培养基上，每试管一块。在20~25公下培养，便可得到母种。用此法制种竹荪母种，菌丝萌发快，技术易掌握。
上述竹荪制种方法得到的母种，一般应纯化转管，次数以2~3次为宜。操作应严格无菌，将原母种琼脂切成小块，一支25*200毫米的试管，可转接30~40支斜面培养基试管。接种时，菌丝面向上，琼脂面在下，贴好标签，在20~25C下培养，20~35天菌丝即可布满整个斜面，经纯化转管的母种，再制作原种和裁培种。
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