祝希娟，1938年1月17日出生于江西省赣州市，原籍江西省南昌市，1952年，还在念初中的祝希娟参演了由赵丹执导的剧情电影《为孩子们祝福》。
1957年，祝希娟考入上海戏剧学院表演系。1960年，从学校毕业后担任了上海戏剧学院实验话剧团、上海青年话剧团的演员。
1961年，与王心刚合作主演战争电影《红色娘子军》，在片中饰演性格顽强、泼辣、勇敢、朴实的吴琼花，她凭借该片获得首届大众电影百花奖最佳女演员奖。
1962年，与王尚信、王熙岩联合主演剧情电影《燎原》；同年，祝希娟被中国文化部评为中国电影二十二大影星。
